文档介绍：浙江大学硕士学位——
摘要
产壳聚糖酶青霉属菌发酵粗酶液经硫酸钱分级沉
淀, 凝胶过滤层析,对壳聚糖酶进行分离纯化,经纯化后酶的
比活力为,纯化,,倍。件的最适温度和分别为℃和,金属
离子和对酶活力有一定的促进作用,重金属离子十,十和
对酶有较强的抑制作用,该壳聚糖酶具有很强的底物专一性,动力学参数值
为’
以几丁质为载体,戊二醛为交联剂,固定壳聚糖酶,对壳聚糖酶的固定化条
件、固定化酶的性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为克几丁质与
戊二醛交联,固定壳聚糖酶,最佳固定时间,在此条件下酶活力回
收可达伸定化酶的最适温度和分别“℃和,动力学参数、值
为。将固定化酶于℃水浴保温酶活力未见明显下降。该固
定化酶具有良好的操作和保存稳定性。厂‘犷
采用酶降解法制备壳寡聚糖,分别考察了温度、、加酶等因素对酶降
解反应的影响,确定了酶降解的最佳条件为温度扭用壳聚糖
作为底物浓度进行降解,降解产物通过离子交换色谱进行分离,得到了聚合度分
别为的壳寡聚糖。采用渗透气压法对不同降解时间的降解产物进行
分子量测定,其测定的分子分别为夕一一了
关键词壳聚糖壳聚糖酶纯化固定化降寡聚糖
浙江大学硕士学位卒
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浙江大学硕士学位论文
月青
人类已进入世纪,随着人们生活水平的不断提高,人们的健康意识越来
越强,希望通过各种途径促进自己的身体健康,服用保健品便是其中的途径之一。
壳聚糖是由氨基葡萄糖通过键连接而成的天然线性高聚物,是一种含氮
多糖类天然活性物质,对人体有十分重要的生理功能,年国际甲壳素大会
上其被确定为人体所必需的除糖、蛋白质、脂肪、维生素和矿物质以外的第六生
命要素壳聚糖能溶于稀酸中,但也需要通过人体中的壳聚糖酶等的作用,经转
化为低糖后才能被人体吸收,这大大限制了它们的功效。近年来,随着研究的深
入,人们发现壳聚糖经水解生成的壳寡聚糖不仅其溶解度大幅提高,易于被人体
吸收利用,而且还具有抗肿瘤、抗菌免疫激活以及保湿吸湿等许多独特的生理活
性,其在医药、保健品方面的应用令人瞩目。
壳寡聚搪的制备主要有化学降解法和酶降解法,采用化学降解法寡糖得率
低,产物分离困难,环境污染严重,近年来己逐渐被淘汰而采用酶降解法具有
反应条件温和,寡糖得率高,不产生环境污染等优点,是目前发展的方向
固定化酶技术是提高生物催化剂的利用效率和生物反应器速率的最有效的
方法之一,它还有助于实现高效率的连续化和重复化的生产过程
目前国际国内都有发现有许多微生物能产生壳聚糖酶,但这些壳聚糖酶的活
力都比较低,且价格昂贵,因此,为了得到高活性的壳聚糖酶,本实验室从自然
界土壤中分离、筛选得到一株高产壳聚糖酶的菌株,并对产酶条件进行了优化。
本论文的主要工作是对该壳聚搪酶进行分离纯化,并对壳聚糖酶的各种性质
进行研究,同时将该壳聚糖酶固定在几丁质载体上,制成固定化酶,并对固定化
酶的性质进行了研究,最后本文还采用酶降解法制备壳寡聚糖。
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第一章文献综述
壳聚糖是一种从海洋水生甲壳类动物外壳或真菌细胞壁中提取
的天然多糖,它是由氨基葡萄糖通过键连接而成的天然线性高分子聚合
物,壳聚糖为含氮多糖类生物活性物质,对人体具有十分重要的生理功能。但由
于壳聚糖分子量大,水溶性差,在人体内不易吸收,使其应用受到限制而经壳
聚糖降解得到的壳寡聚糖不仅具有水溶性好,易吸收等优点,近年来更发现其还
具有许多独特的生理活性和功能性质,如在人体肠道内活化增殖双歧杆菌,提高
巨噬细胞的吞噬能力,促进脾脏抗体的生长,抑制肿瘤细胞的生长,降低血压、
血脂以及在微环境中具有较强的抗菌抑菌作用等,其应用前景尤其在食品、
医药、保健品方面倍受瞩目。目前制备壳寡聚糖的方法主要有化学法和酶降
解法,采用化学法降解寡糖得率低,产物分离困难,且对环境污染严重,近
年来已逐渐被淘汰,而酶降解法具有反应条件温和,寡糖得率高,不造成环境污
染等优点,逐渐成为目前制备壳寡聚糖的主要方法。
固定化酶是二十世纪六十年代发展起来的一项新技术,在固定化酶研究的
初期,人们主要集中于各种制备方法的研究,近年来,人们的注意力己开始转向
固定化酶与固定化细胞在工业、农业、医学、化学分析、环境保护等方面的应用,
目前己取得许多重要成果,发挥了巨大作用人们在实际的应用中,充分发挥了
固定化酶和固定化细胞在改革工艺和降低成本方面的巨大潜力,因此,很多人把
固定化酶称为“长效的酶”,“无公害催化剂”。
本章将对壳聚糖酶的产生、制备及