文档介绍：精子形态学分析正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。目前, 用于精子形态学分析的染色方法有: 改良巴氏染色法、苏木精- 伊红( HE ) 染色法、瑞氏染色法、瑞- 吉氏染色法、 Diff-Quik 染色法和 Shorr 染色法。 1 涂片的制备一般用新鲜的液化精液或生理盐水洗涤过的精子悬液进行涂片,通常每份标本涂双份片子, 以备染色或操作出问题。载玻片应洁净,可用 70% 酒精洗涤并干燥后使用;涂片的厚薄应根据精子密度而定, 精子密度高者涂片应薄些, 而精子密度低者涂片应尽可能厚些。涂片的方法有多种, WHO 推荐的方法有拉薄技术和滴管法, 拉薄技术即用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液; 滴管法即水平持滴管使一滴精液沿载玻片的表面展开。由于精液有一定粘稠度, 这两种方法都很难涂成均匀的涂片。可建议用以下方法涂片: 用滴管将一滴精液置于载玻片上, 然后从液滴中央向周围循环吸净多余的精液, 注意滴管的头要平整, 滴管与载玻片垂直, 缓慢吸去多余的液体。低密度、粘稠的、或充满碎屑的标本, 建议先离心去除精浆,沉淀的精子团重新悬浮在适当体积中,以获得尽可能高的密度,但不应超过 80× 106/ml 。正常精子密度且液化良好的精液标本亦可以洗涤后用精子悬液进行涂片,但离心操作对精子形态分析有无影响,尚需要进一步验证。精子涂片可进行空气干燥并固定。固定程序取决于染色方法。 2 改良巴氏染色法这是 WHO 手册推荐的方法。它可以使精子和其他细胞很好地染色, 可使精子头部的顶体和顶体后区、胞浆小滴、中段和尾部着色。染液中的俾士麦棕为盐基性染料,伊红、亮绿、橙黄等为酸性染料, 能与细胞中具有相反电荷的蛋白质结合, 而染成各种不同的颜色, 从而能清楚地区分各种细胞成分。以往用巴氏染色法进行染色时, 操作步骤繁琐, 目前已有改良的单一的巴氏染色液出售, 操作非常简单, 只需在自然干燥的精子涂片上滴加 1~2 滴巴氏染液, 染 15 分钟即可。流水冲洗后自然晾干,显微镜油镜下观察精子形态。 3 HE 染色带正电荷的碱性染料苏木素能与细胞核中带负电荷的核酸结合而使核染成紫蓝色, 伊红为酸性染料, 能与细胞质中具有相反电荷的蛋白质结合, 使胞质呈红色。 HE 染色为医院病理科的常用染色方法, 操作比较繁琐, 对于可以借助病理科染色的医疗单位可以选用此法对精子进行染色。 4 瑞氏和瑞- 吉氏染色法瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料, 细胞染色后可用于观察内部结构; 吉氏染料是由天青、伊红组成的染料, 天青对细胞核着色较好, 结构显示更清晰。因此, 瑞- 吉氏染色法比瑞氏染色法效果稍好些, 两种染液均可自行配制或购买, 操作都比较简单。①瑞氏染液: 取瑞氏染料 g 放入清洁干燥的研钵中, 边加少量甲醇边磨至染料完全溶解, 加甲醇到 60 ml ,倒入棕色瓶中,室温下放置 1 周以后即可用。② Giemsa 染液:取 Giems a 染料 g, 置于 33 ml 甘油中, 60℃水浴 2 小时, 使其溶解, 再加入 60℃预热的甲醇 33 ml , 混匀后置棕色瓶中, 室温下放置数周后方能使用( 最好放置半年以上)。③ mol/L pH6. 9 磷酸盐缓冲液:称取 NaH2PO4 ? 2H2O g、 Na2HP