文档介绍：实验 1 大肠杆菌的培养和分离
高二年级 班 姓名 学号：
实验日期：____月 日
【知识准备】
1．背景知识：
大肠杆菌（Escherichia coli，）是微生物学和遗传学常用的实验材料，为单细胞原核生
物，宽约 ×1～3 微米；具有由肽聚糖组成的细胞壁；周身具 鞭毛，能运动。
大肠杆菌是在人和动物肠道中生活的、不会致病的正常栖居菌，但若进入胆囊、膀胱等处也会引
起炎症。它能利用多种糖类物质产酸、产气，其代谢类型为异养兼性厌氧型；其代谢活动能产生大肠
杆菌素（抑制肠道内其他分解蛋白质的微生物生长），还能合成维生素 B 和 K。它们在肠道中大量繁殖，
几乎占粪便干重的 1/3。
实验室中用于培养微生物的营养物质称为培养基。按培养基的物理状态可分为：液体培养基和固
体培养基。将已知的菌种引入新配制的培养基的过程称为接种。而在固体培养基表面用蘸有菌种的接
种环连续划线，既可以达到接种的目的，又可以实现分离菌种的目的。这是因为划线过程中接种环与
培养基表面接触，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分细菌间的距离加大，经过培养后可出
现由单个细菌细胞形成单菌落，这样就达到了分离细菌的目的。
2．实验原理：
使用通用的细菌培养基（如 LB 液体培养基）可扩大培养大肠杆菌，使大肠杆菌迅速扩增。
在 LB 固体平面培养基上对大肠杆菌进行划线分离，经培养后培养基上每一个菌体会形成一个单
独的菌落。这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选突变菌株的最简便方法之一。
为保证配制的培养基上只生长大肠杆菌，而不被其他微生物污染，实验过程中要进行无菌操作。
3．思考题
（1）为什么培养过程中会出现被其他微生物污染的现象？
（2）进行了无菌操作是否肯定就不会出现被其他微生物污染的现象吗？
（3）本实验的关键步骤——划线分离的目的是什么？
（4）在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?在
操作过程中应注意什么？
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【实验目的】
1．利用液体培养基进行大肠杆菌的扩增
2．用固体平面培养基进行大肠杆菌的划线分离
3．了解微生物实验的操作原理和培养条件
【材料用具】
大肠杆菌菌种
装有固体培养基的、已灭菌培养皿；装有 LB 液体培养基的、已灭菌的 250ml 三角瓶
封口膜和橡皮圈 酒精灯 接种环 镊子 装有酒精棉球的广口瓶
恒温培养箱 摇床
【操作流程】
灭菌、消毒 划线、接种 培养、观察
【实验步骤】
1．接种前的准备