文档介绍：致谢
在三年的硕士生学习生涯中,导师陈卫良副教授为我的学习和论文
完成作出了悉心指导,论文的选题、研究、撰写和修改都凝聚了导师的
大量心血。导师丰富扎实的专业知识、勤奋严谨的治学态度、豁达平和
的处世作风,使我不论在学习、工作和生活中都获益匪浅。谨此致以由
衷的敬意和深深的感谢
浙江大学测试中心马志超副教授在拮抗物质的分离纯化和分析方
面给予了大力帮助李德葆教授、林福呈老师、王政逸老师在不同方面
给予了热情关怀李大勇、杨中华同学在田间防治试验中提供了竭力帮
助,在此一并致谢。廖乾生、李靖、黄晓操、于翠、邵伯飞、王旭东、
朱洁同学以及生物技术研究所的其他同学在我需要的时候都热情地给
予了支持和帮助,在此向他们表示我的谢意同时要感谢生物技术研究
所的各位老师的关心和鼓励
最后,我要感谢我的家人,没有他们一如既往的无私关爱和支持
我无以顺利并愉快地完成学业
何青芳
年月
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抗水稻纹枯病细菌拮抗物质
及菌株基因突变的研究
摘要
拮抗细菌菌株分离自水稻叶围。平皿测试表明
对多种植物病原菌,如病原真菌水稻纹枯病菌
、稻瘟病菌等,病原细菌稻白叶枯病菌
等有强烈抑制作用。
对该菌株的生长曲线及活性曲线进行分析,可知当细菌生长到对数生长中
期时约为,拮抗活性开始被检测出在细菌生长进入稳定生长
期后,拮抗活性达到最大,随后趋于稳定。
一将拮抗菌菌株接种于液体培养基中,℃下培养小时,然后
离心去菌体,所得的去菌培养液用的硫酸钱沉淀过夜后
离心。将得到的沉淀用磷酸缓冲液悬浮,悬浮液离心去杂后
通过疏水色谱和反相色谱进行分离纯化,最后纯化得到一种拮
抗物质。经质谱初步判断其分子量为物质经酸
处理后活性有部分降低,对碱稳定经高温处理仍保持活性同
时该物质对蛋白酶和胰蛋白酶以及乙醇、异丙醇、乙睛等有机溶剂具有稳
定性。另外,的荀三酮反应为阴性,但经酸水解后,茹三酮反应和双缩脉
反应呈阳性。根据以上结果推测它可能为一种环肤,或者为含有非氨基酸组
分的肤类化合物。但拮抗菌菌株去菌培养液经的硫酸按沉淀后所得
的悬浮液通过分子量截流管截流试验发现,拮抗物质可被截流管截流,
由此分析其分子量应大于,这可能是因为拮抗物质与某种大分子结合
造成的。
用含转座子的质粒转化菌株感受态细胞,在红霉素
和卡那霉素双抗培养基上筛选获得个转化子,经质粒检测发现这六株转化
子均含有质粒。利用质粒含有温度敏感基因的特点,通过高
畜析幻二大学硕士学位论文拍圣
温处理和红霉素卡那霉素培养基筛选,获得一批对卡那霉素敏感丧失质粒
但对红霉素有抗性转座子插入染色体的突变株经抽样活性
检测发现这些突变株丧失了拈抗活性。另外,用一系列浓度梯度递增的利福
平诱导得到的抗利福平突变株,其不仅具有与野生株相似的形态,还表
现出与野生株相近的拮抗活性。
水稻纹枯病菌菌丝块经拮抗细菌菌株的去菌培养液处理后,在滤纸
上生长很缓慢,且有纠集状白色颗粒菌丝纠集体出现而对照菌丝块在
滤纸上生长较快,菌丝舒展,无纠集现象。通过光镜观察,前者的菌丝有生
长扭曲,分枝增多、缩短,菌丝明显变细等异常形态学变化而对照则生长
正常,菌丝粗壮。同时,研究发现浸过拮抗细菌菌株去菌培养液的菌核
萌发率只有,菌丝稀疏、细弱对照菌核萌发率高达菌丝浓密、
粗壮。经水稻叶片离体试验,用去菌发酵液浸过的水稻纹枯病菌菌丝块
比正常生长的水稻纹枯病菌菌丝块侵染水稻叶片的能力低形成的病斑数量、
大小也要少。在田间试验中菌抹发酵液对水稻纹枯病表现出了较好的防
治效果,防效与井岗霉素相当。丫
关键词水稻纹枯病拮抗细菌拮抗物质纯化理化性质
防病作用
浙玄工大学硕月士学位论文拍圣
浙大学硬门士学位论文位冬

初
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第一章文献综述
一、植物病害的生物防治研究
植物病害的生物防治是指通过除人以外的一种或多种生物来降低病原物
数量或减弱病原的致病活力,从而减少病原物所致病害的发生
植物寄主周围不仅存在病原菌,还存在着大量的非病原菌,其中有的还是病
原菌的拮抗微生物。这些拮抗微生物可通过与病原菌的抗生作用、竞争作用、
重寄生作用及诱导植物产生系统抗性等机理来抑制病原,达到防治植物病害
的目的。此外,拮抗微生物对环境安全,不会象化学农药那样造成环境污染
以及对人畜的毒害,同时拮抗微生物不易使病原菌产生耐药性,有些还具有
促进植物生长的作用,且实际生产工艺简单,因此利用拮抗微生物防治病害
的研究正越来越受到国内外科