文档介绍：选修3易考知识点背诵
专题1 基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，
通过体外DN®组和转基因技术，赋予生物以 新的遗传 特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产 晶。基因工程是在 DN心子水平 上进行设计和施工的. 又叫做DNAlt组技术。
(一)基因工程的基本工具
”分子手术刀”一一限制性核酸内切酶(限制酶) (1)来源：主要是从 原核牛物中分离纯化出来的。
(2)功能：能够识别双链 DNA^子的某种 特定的核音 酸序列，并且使每一条链中 特定部位的两个 核甘酸之间的 磷酸二酯键 支 二性。
(3)结果：经限制酶切割产生的 DN*段末端通常有
两种形式：黏性末端 和平末端。
”分子缝合针” 一一DNA1接酶
⑴两种DNAS接酶(E・coliDNA连接酶和T4-DNAS接 酶)的比较：
①相同点：都缝合 磷酸二酯 键。
②区别：E - coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将 双链DNAfr段互补的 黏性末端 之间的磷酸二酯
键连接起来；而T,DNA^接酶能缝合两种末端， 但连接平末端的之间的效率较 低。
⑵与DN谦合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核 键。DNA1接酶是连接两个
DNA片段的末端,形成磷 酸二酯键。
”分子运输车”一一载也
(1)载体具备的条件：① 能在受体细胞中复制并稳定 保存。
②具有一至多个限制酶切点.
供外源DN*段插入。
③ DNA 的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是 质拉，它是一种裸露的、结构简单 的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能 力的双链环状DNA分子。
(3)其它载体： 噬菌体的衍牛物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。
.原核基因采取 人工合成, 人工合成目的基因的常用方法有 反转录法_和化学合 成法 O
.PCR技术扩增目的基因
(1)原理：DNA^链复制
(2)过程：第一步：加热至 90〜95CDNAK链；第二 步：冷却到55〜60C,引物结合到互补 DNAA连；第三 步：加热至70〜75C,热稳定DN谦合酶从引物起始 互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
.目的：使目的基因在受体细胞中 稳定存在,并且可以 。
.组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
(1)启动子：是一段有特殊结构的 DNA片段,位于基 因的苴遍，是RNA^ 因转录出mRNA最终获得所需的 蛋白质。
(2)终止子：也是一段有特殊结构的 DN* 基因的尾端。
(3)标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中 是否含 有目的基因，从而将含有目的基因的细胞 筛选出来。常 用的标记基因是抗生素基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞 _
.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内， 并且在受 体细胞内维持稳定和表达的过程。
.常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌
转化法，其次还有 基因枪法 和 花粉管通道法 等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射
技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
将目的基因导入微生物细胞： 原核生物作为受体细胞的 原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最
常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用 C a2二处理细胞，使其成为 感受态细胞，再将重组表
达载体DN心子 一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA^子，完成转化
过程。
.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受 体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
.首先要检测 转基因牛物的染色体 DNA匕是否插入了 目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。
.其次还要检测 目的基因是否转录出了 mRNA方法是 采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA^交。
.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转 基因生物中提取 抗体讲行抗原- 抗体杂交。
.有时还需进行 个体牛物学水平 的鉴定。如 转基因抗 虫植物是否出现抗虫性状 。
（三）基因工程的应用
.植物基因工程;「抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用 孩拿因政良植物的品质。「…
.动物基因，程：提高地物先后速度、-,改善畜产品品质、 用装整固动物生产约物?
.基田治也L J峡曲前夕岛（息K惇人病人体内； 使该基 因表达产物发挥作