文档介绍：《生物制药技术》实验指导
实验三四环素、金霉素的薄层层析鉴定（验证型）
实验目的：
掌握薄层层析的原理，四环素族抗生素的定性鉴定方法。实验原理：
层析（色谱，chromatography）是相当重要、且相当常见的一种技术，在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相，把液体（与上述液体不相混合的）或气体作为
移动相的系统中（根据移动相种类的不同，分为液相层析和气相层析二种），使试料混合物
中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动，利用各成分对固定相亲和力不同所引起的
移动速度差，将它们彼此分离开的定性与定量分析方法，称为层析，亦称色谱法。用作固定
相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等，或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进
行的层析称为柱层析（column chromatography）,在玻璃板上涂上一层薄而均的支持物（硅胶、纤维素和淀粉等）作为固定相的称为薄层层析（ thin layer chromatography）,或者用滤纸作为固定相的纸上层析。层析根据固定相与溶质（试料）间亲和力的差异分为吸附型、分
配型、离子交换型层析等类型。但这并不是很严格的，有时常见到其中间类型。此外，近来也应用亲和层析，即将与基质类似的化合物（通常为共价键）结合到固定相上，再利用其特
异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。
分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。一般是水相和有机溶剂相。常用支持物
是硅胶、纤维素和淀粉等亲水物质，这些物质能储留相当量的水。被分离物质在两相中都能溶解，但分配系数不同，展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。一种溶质在两种互不
混溶的溶剂系统中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在固定相和流动相溶剂中的浓度之比为一常数，称为分配系数。当欲被分离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数
不同时，它们就能被分离开。分配系数大的移动快（阻力小）。
薄层层析是以薄层材料为支持物，在密闭容器中，样品在其上展开。当斑点不易为肉眼观察时，可利用适当的显色剂，或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。通过这种展开操
作，各成分呈斑点状移动到各自的位置上，再根据 Rf值的测定进行鉴定。薄层色谱法具有
分离与鉴定的双重功能，通过薄层图谱与对照品的图谱相比较，除了能鉴出有效成分或特征
成分外，还以完整的色谱图作为一个整体对制剂加以鉴别。薄层色谱分析法由于简便、快速,
能有效地、直观地反映药品地真实性、稳定性，现已成为药物制剂的鉴别和质量控制的行之有效的方法之一。薄层层析是鉴别抗生素的方法之一，层析后进行显色，并绘制层析图谱，根据层析图谱对抗生素进行鉴定。本实验以四环素、金霉素标准品溶液作为对照对发酵液进
行鉴定。材料、试剂和器材：仪器和设备：
玻璃层析缸；层析板（薄层层析硅胶烟台芝果区黄务硅胶开发实验厂有售）；吹风机；
紫外投射仪；离心机（）试剂：
四环素、金霉素标准品（1000U/ml ） M盐酸溶解并稀释定容4对冰箱保存（可使用7天）。
展开剂：正丁醇：醋酸：水（4: 1: 5）2L.
草酸、氨水
其它物品：