文档介绍：: .
免疫学实验指导
生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用
冯玉萍
［分组］：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计
［班级］ 2006生物工程、生物技术［学生人数］：65人/58 人。分 16组/15 组
［时间］ 2008年 3月— 2008年 7月两周一次 4学时。
目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与 E 玫瑰花环形成试验实验五、 IgG 的分离和纯化实验六、玻片凝集试验（ABO 血型鉴定）实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验（单向）实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验
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实验一、免疫学实验动物的一般操作
［实验原理］实验动物的基本操作是免疫学实验的基础 ,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。
［目的要求］
1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）
2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。［自学］
3、学****实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。
4、练****对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。
5、练****小白鼠的取血方法。
6、学****血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。
［实验动物］小白鼠， 2 只/组，共需 18 ~ 20只。
［试剂］
⑴ 3%来苏儿或 3%石炭酸 100~150 ml/ 组；
⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染色用）。
⑶3 ~ 5%苦味酸20~50ml/组（带滴管，编号用）；
⑷5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；
⑸ 瑞特氏（wright ‘ s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）； *抗凝剂一支
［器材］
⑴ 1ml 注射器及针头 2 支 /组；
⑵ 碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；
⑶ 手术剪刀 2 把/组；镊子 2 把/组；载玻片、盖玻片各 6 片 /组；
⑷ 毛细吸管 2 支、 50—100ml 烧杯 1 个/组
⑸ 显微镜 6 台 /组
［6］鼠笼 1 个 /组
［操作步骤］
1、练****小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。（见
《免疫学实验》 P9-13。
2、练****小白鼠尾静脉取血法。（ P15）
实验报告要求：
1 、时间、地点、操作人、同组人、指导老师。
2、实验原理、目的要求
3、实验操作记录（实验步骤、结果）
4、分析总结：依据实验原理、目的要求，分析总结实验是否成功，是否达到实验目的？为什么？
5、对实验动物编号有何实际意义，你对书中关于小白鼠的编号方法有何想法？有无更简便、实用的方法？
6、若给动物注射传染性材料应注意些什么？
实验二、免疫器官与免疫细胞观察
［实验原理］
免疫器官、免疫细胞是动物免疫系统的主体。在胸腺、脾脏中有大量淋巴细胞存在，在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在，发挥着免疫监
视作用。
［目的要求］
1、练****血涂片的制作
附图2-1血片制备方法
2、学****小鼠颈椎脱臼致死的方法，观察小白鼠的解剖结构；
3、学****脾脏、胸腺的触片制备与染色方法；观察小鼠脾脏触片、血液涂片中的免疫细胞，并画图。
［方法与步骤］
1、练****血涂片的制作（3张/组）
1）准备一张洁净玻片，取血1滴于玻片右侧，另取一光边玻片的一端，放在血滴前方，并逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开，然后将推片与载片保持 30 一 45度角,平稳地向前推动，至玻片另一端，载玻片上便留下一层血膜。良好的血膜象舌头，头、体、尾鲜明，厚薄适宜、分布均匀，边缘整齐,两侧留有空隙。
2）染色：
A、瑞特氏（WrightFs）染色法：
① .血涂片制成后可在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。选择良好的血片，用特种玻璃铅笔画出两边界限（注意保留尾部，因体积大的细胞往往在此出现），以防染液外溢。
② 在血膜上滴加几滴瑞氏染色液，左右晃动，使染液完全覆盖血膜，注意染液不宜过多而溢出界限，亦不能过少而干燥。
③ 1 — 2min后，滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水， 2 — 3min后，可见表面有金属光泽，即可用清水轻轻冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。在正常的情况下，血膜外观染成粉红