文档介绍：免疫学实验指导
实验一小鼠免疫器官观察
一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官。
二、实验内容在带教老师的指导下,解剖小鼠,观察胸腺、脾脏等免疫器官。
小鼠是啮齿目中体形较小的动物,其淋巴系统很发达,包括淋巴管、胸腺、脾脏、外周淋巴结以及肠道派伊尔淋巴集结。
1、材料:小鼠,镊子、剪刀、手术刀(应先行煮沸或于热灭菌),3%来苏尔水、
2、操作
①小鼠脱颈处死,投入盛有3%来苏尔水的缸内,浸泡5分钟取出。
②小鼠仰卧置于实验台上,以镊子提起耻骨缝皮肤,用剪刀沿正中线剪开直至下颌部,然后用刀柄剥离皮肤,再把皮肤向四肢剪开。
③观察腹壁,然后用无菌剪刀沿正中线自阴部至隔肌为止剪开,观察脾脏。
④切开隔肌,剪断胸骨两侧软肋骨,翻起胸骨,观察胸腺,胸腺位于小鼠胸骨后,心前上方,内有许多大淋巴细胞(即前胸腺细胞)及特定的上皮网状细胞(分泌胸腺激素)。
⑤解剖结束,深埋动物。
实验二非特异性免疫(1)
一、实验目的
1、了解免疫应答的类型。
2、熟悉细胞吞噬功能测试的操作过程及意义。
二、实验内容
(一)巨噬细胞吞噬实验
1、材料:小白鼠、l%鸡血球、2%淀粉肉汤、无菌注射器、针头及玻片、瑞特氏染液。
2、方法
①于24小时前在小鼠腹腔注射lml淀粉肉汤。
②次日重复注射淀粉肉汤lml,1小时后给小鼠腹腔注射l%鸡血球lml。
③l小时用注射器抽取小鼠腹腔渗出液作涂片,用瑞特氏染液进行染色。
染色过程:涂片→自然干燥后用甲醇固定→滴加瑞特氏染液数滴,染色1分钟→加等量的蒸馏水或PBS,轻摇玻片使与染液混匀,静置5-8分钟→水洗→干燥镜检。
3、结果
①吞噬百分率:油镜下观察100个巨噬细胞(分母),计数吞噬了鸡血球的巨噬细胞(分子)。吞噬百分率表示吞噬细胞的吞噬功能,正常值为80%左右。
②吞噬指数:按下列公式计算:
吞噬指数=100个吞噬细胞中所吞噬的鸡红细胞总数/100(吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞数)
③吞噬鸡红细胞的等级观察:判断巨噬细胞吞噬和消化功能, I级表示吞噬功能,Ⅱ-Ⅳ级表示消化功能强弱。
I级:被吞噬的鸡红细胞完整,未消化,胞浆浅红或浅黄绿色,胞核浅紫红色。
Ⅱ级:轻度消化,胞浆浅黄绿色,核固缩,染成紫蓝色。
Ⅲ级:重度消化,胞浆淡染,胞核呈浅灰黄色。
Ⅳ级:完全消化,巨噬细胞内见形态类似红细胞大小的空泡,边沿整齐,胞核隐约可见。
注:鸡红细胞呈椭圆形,有细胞核。
(二)中性粒细胞的吞噬试验
1、材料与方法
①实验前1小时注射无菌肉汤lml于小白鼠腹腔内,诱导浆液渗出。
②用无菌生理盐水洗下葡萄球菌18—24小时培养物,经Mcfaland比浊配成含3亿/ml的细菌悬液。
③给小白鼠腹腔内注射上述菌液lml,让小鼠活动。
④分别于20分钟、40分钟、60分钟后抽取腹腔液涂片,瑞特氏染色后镜检。
2、结果:油镜下见中性粒细胞核深染且分叶,极易与其它细胞相区别。随机计数100个中性粒细胞,分别计数吞噬有细菌的中性粒细胞数和所吞噬的细菌总数,参照前公式,计算出吞噬百分率和吞噬指数。吞噬百分率和吞噬指数高低表明机体的免疫力强弱。
实验三非特异性免疫(2)
一、实验目的
1、了解血脑屏障的作用。
2、熟悉唾液溶菌酶测定(平板法)的原理和操作。
二、实验内容
(一)血脑屏障
1、作用:血脑屏障是机体的屏障结构的重要组成部分。血脑屏障主要有软脑膜、脉络膜、脑毛细血管和(星状)胶质细胞构成。该组织结构致密,病原菌及其它大分子物质不易通过,故能保护中枢神经系统。
2、材料:5%台盼兰、2只小白鼠、无菌生理盐水、眼科剪子、眼科镊子、止血钳。
3、方法:
①将5%台盼兰水溶液经尾静脉分别注入2只小白鼠体内,。。
②5-10分钟观察小白鼠皮肤、眼、嘴等的颜色变化。
③30-60分钟后,见小白鼠眼、嘴呈现蓝色,即窒息死亡,腹部朝下固定。
④由头到尾部沿背中线剪开皮肤,暴露皮下、肌肉和内脏,观察颜色变化。小心剖开颅骨椎管,暴露脑和脊髓,与皮下、肌肉及内脏相比,并比较两只小鼠有何不同。
(二)溶菌酶溶菌实验
1、原理:溶菌酶是存在正常体液(巨噬细胞和中性粒细胞的溶酶体中)和外分泌液中的一中小分子蛋白质,是机体的非特异性体液杀菌因素之一,属乙酰氨基多糖酶。它主要作用于革兰氏阴性菌,如变性杆菌,痢疾杆菌,大肠杆菌,亦有溶解作用。简单的溶菌酶含量测定方法,可用琼脂平板测直径和比色法测浊度。下面介绍琼脂平板法。
黄色微球菌(us lysodeikticus)对溶菌酶高度敏感。将一定量的该菌菌液与琼脂混匀,浇入平板,冷却、打孔、与孔内加入待检样品,置26℃孵箱18小时,待检样品中的溶菌酶向周围扩散,经