文档介绍：PCR 基因扩增与性别鉴定原理?1、 PCR 技术的原理? PCR 技术是多聚酶链式反应技术的简称,由于1983 年发明,为一种在体外快速扩增特定基因或 DNA 序列的技术。? PCR 技术操作简单,可在短时间内获得数百万个特异序列的拷贝,因此 PCR 技术虽然问世时间仅数年,但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域。在分子克隆、遗传病的基因诊断、法医学、考古学等方面均得到了广泛的应用。 PCR 基因扩增与性别鉴定原理? PCR 技术与细胞内发生的 DNA 复制过程十分类似, 为在模板 DNA 、引物( 16bp 以上,最好为 20~24bp 和4 种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶的酶促合成反应。按照反应的特点可将其分为三步: ?⑴、变性?通过加热使 DNA 双螺旋的氢键断裂, 双链解开形成单链。?⑵、退火?使碱基互补的链形成双螺旋结构。 PCR 基因扩增与性别鉴定原理?由于模板分子结构较引物要复杂的多,而且反应体系中引物 DNA 量大大多于模板, 使引物和其互补的模板在局部形成杂交链, 而模板 DNA 双链之间互补的机会较少; ?⑶、延伸?在 DNA 聚合酶和 4 种脱氧核苷三磷酸底物及 Mg 2+存在的条件下,由 DNA 聚合酶 5’→ 3’的聚合酶活性催化以引物为起点的 DNA 链延伸反应。?以上 3 步为一个循环,每一循环的产物均可作为下一个循环的模板,数小时之后,介于两个引物之间的特异性 DNA 片段将得到大量的复制,数量可达到 2×10 6~7拷贝。 0 0( DNA 分子数 2 25~30 ) 循环 25~30 次目的 DNA 数目达到 10 6~7 5’3’3’5’ 5’3’3’5’94℃变性,双链 DNA 分子解链成为两条单链 5’3’3’5’引物 1引物 255℃退火,引物与模板 DNA 结合 72℃延伸,以引物为起点延伸 DNA 链 5’3’3’5’ 3’5’( DNA 分子数 2 1) 94℃变性(第 2次循环) 5’3’5’3’5’3’5’3’引物 1引物 255℃退火 5’3’3’5’5’3’ 5’3’ 5’3’5’3’3’5’ 5’3’ 72℃延伸( DNA 分子数 2 2) PCR 基因扩增与性别鉴定原理?如图所示,经过高温变性,低温退火和中温延伸 3 个温度的循环,模板上介于两个引物之间的片段不断得到扩增。?每循环一次,目的 DNA 的拷贝数加倍,随着循环次数的增加,目的 DNA 以2 n的形式积累。?因此, PCR 技术可应用于只含有痕量 DNA 的样品, 包括