文档介绍：湖北大学
硕士学位论文
水稻NR和NIR基因启动子的克隆及功能验证
姓名:胡静
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:吴文华
20090501
摘要原酶脱窍趸乖富Ⅳ肷腸蛄登陆号分别为:分别用和蚱舳悠稳〈鷓上的肠以基因和水稻是世界上最重要的粮食作物之一,也是植物基因组研究的模式植物。在前期研究的基础上,通过检索网站的水稻基因组数据库,找到水稻硝酸还和S胑蛄性贜蠦分析,检索到和因的蛄登陆号分别为:Mü齈方法从水稻基因组中成功克隆到受硝酸盐诱导的和嫌纹舳有蛄校别长糇和隚ǖ佬蛄邢啾冉希葱跃高达%。用作顺式作用元件分析,发现两段启动子序列含有多个与转录调控有关的保守序列鏣産、.虶産舳樱菇撕珿基因的植物双元表达载体:和甆。主要用于和蚬δ艿募ā9菇ㄍ瓿傻闹参双元表达载体通过农杆菌介导的方法转化水稻愈伤组织,通过瞬时表达检测基因活性,分析启动子的功能。研究表明,和蚱舳悠蔚钠舳功能均受硝酸盐诱导。目前,基因功能及调控外源基因在转基因植物中精确表达等方面的研究成为当前植物基因工程研究的重点,而这些工作的开展主要依靠一个合适的启动子来实现。利用从已知芪粗F舳踊蚱渌骺厍蛑锌寺〉玫降乃綨和虻纳嫌吻蛄校赡苁且恢志哂小翱9亍被钚缘目煽匦云舳印关键词:水稻;硝酸还原酶基因;亚硝酸还原酶基因;硝酸盐;启动子;克隆;植物表达载体;瞬时表达;颍和
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缩略词表
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,作为转录水平上一种重要的调控元件,启动子的研究已成为分子生物学研究的热点和前沿。基因的表达在不同层次上受不同的协调因素控制,这种控制机制不仅决定基因表达的水平,也决定着基因表达的时空顺序。启动子是基因幸欢翁囟ǖ暮塑账嵝蛄校舛涡蛄惺怯肫舳虮泶相关的顺式作用元件.,是酆厦冈谧B计鹗际倍阅0氖侗鹞坏徒岷衔坏湎掠问腔蜃录的开始部位匀灰簿褪亲B际欠衲芷鹗嫉木龆ㄎ坏阖。它与酆厦敢约捌渌鞍赘ㄖ蜃拥确词皆<南嗷プ饔檬瞧舳拥骺啬J降实质。植物基因工程中常用的启动子按其作用方式及功能可分为三类:诱导型启⒆槌尚推舳妥橹匾性启动子畇U庵址掷啻筇迳戏从沉怂歉髯缘奶氐悖但在某些情况下,一种类型的启动子往往兼有其它类型启动子的特性。.诱导型启动子诱导型启动子是指在一般情况下低水平表达或不表达,当在某些物理或化学信号的刺激下,此种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。它们有以下共同特点:①启动子的活化受物理或化学信号的诱导;②具增强子、沉默子或类似功能的序列结构;③感受特异性诱导的序列都有明显的专一性;④一部分该类型的启动子同时具有组织特异性表达的特点;⑤该类启动子常以诱导信号命名,可分为光诱导表达基因启动子、热诱导表达基因启动子、创伤诱导表达基因启动子、激素诱导表达基因启动子、真菌诱导表达基因启动子和共生细菌诱导表达基因启动子等。由于诱导型启动子能控制基因在特定时期、特定部位表达,这样就避免了动子.
最广泛的组成型启动子包括花椰菜花叶病毒口舳印⒂,同时使宿主细胞对相应的诱导因子做出应答,因此诱导型启动子在基因表达调控研究中具有重要的实际应用价值。.组成型启动子组成型启动子是指不受自身发展和外界环境影响,而在所有组织中都启动下游基因持续表达,具有持续性,不表现时空特异性,偷鞍字时泶锼非常高,且在各个不同组织中相对恒定。从结构上看大多数组成型启动子转录起始点上游几百个核苷酸处,,也称之为器官特异性启动子,包括根特异、花特异、种子特异等多种组织特异性启动子。在这些启动子的调控下,基因的表达往往只