文档介绍：第二节 基因工程的原理和技术
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讨论:
怎样能够在大肠杆菌中产生人的胰岛素?
基因工程的基本原理:让人们感兴趣 的基因在宿主细胞中稳定和高效表达.
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基因工程的基本操作程序主要包括
五个基本步骤：
1）获得目的基因
2）形成重组的DNA分子
3）将重组DNA分子导入受体细胞
4）筛选含有目的基因的受体细胞
5）目的基因的表达
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步骤一：获得目的基因
目的基因是人们所需要转移或改造的基因,
获取目的基因是实施基因工程的第一步 。
如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。
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目的基因的获得
人工合成
利用PCR技术扩增
从基因文库获得
基因文库
基因组文库
部分基因文库
已知序列
未知序列
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1）人工合成
已知其序列
已知其mRNA 的序列
已知其翻译产物的氨基酸序列
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2）聚合酶链式反应即PCR技术
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3）从基因文库中获取目的基因：
基因文库:
将含有某种生物不同基因的许多DN***段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library)
基因组文库:
基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.
部分基因文库:
基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.
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用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其他载体上，再将它们转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到可以包括某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。
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这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿体DNA，分别称为某种生物的线粒体基因文库或叶绿体基因文库。为了有效地保存基因文库，可通过细菌在固体培养基上繁殖而使包含各个特定DN***段的细菌增多。通过分子杂交的方法，可以筛选出包含有所需基因的DN***段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这样的细菌（或噬菌体），从中便可分离出所需基因的DN***段。建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。
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