文档介绍：微生物实验
实验七测定细菌生长曲线
一、实验目的
1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；
2. 学****液体培养基的配制以及接种方法；
3. 反复练****无菌操作技术；
4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；
5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法
二、实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁
殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成
一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一微生物生长曲线示意图
单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、 Ⅱ对数期（生长旺盛
期）、 Ⅲ平衡期（稳定期）、 Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生
长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物
的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比
浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用
分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）
与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度
表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以 G 表示。其
计算公式为：
t − t
G = 2 1
(lgW2 − lgW1 ) / lg 2
式中 t1 和 t2 为所取对数期两点的时间；
W1 和 W2 分别为相应时间测得的细胞含量（g/L）或 OD。
三、实验仪器、材料和用具
1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；
2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基
微生物实验
3. 实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s 分光光度计；
4. 实验用具:无菌 1000ul 吸头 80 个;无菌 5000ul 吸头 2 个;比色皿 9 个+共用参比杯一个.
四、实验步骤
1. 准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养 18h，另
外准备单菌落平板各 1 块
2. 分为三个小组：
第（1）小组
取大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm
取大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基，37 ℃ 200rpm
取大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基，37 ℃ 200rpm
第（2）小组
取一个大肠杆菌菌落接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm
取大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基，37 ℃ 110rpm
取大肠杆菌接种到 100ml 培养基， 30 ℃ 200rpm
第（3）小组
取枯草杆菌接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm