文档介绍：硕士学位论文{lIIIlu }Y1 99781 8 电化学免疫传感器检测AFP和HIV p24的方法学研究研究生:贾立永导师:王前教授摘要研究背景和目的原发性肝癌是发生在肝细胞或肝内胆管细胞的癌,死亡率仅次于胃癌和食管癌,是我国常见的恶性肿瘤之一,且发病率有上升趋势。在我国每年约有11 万人死于肝癌,占全球肝癌死亡人数的45%。手术治疗仍是目前治疗原发性肝癌的最好方法,但是手术治疗往往给病人带来巨大痛苦和经济负担。为了降低原发性肝癌的发病率和死亡率、减少手术对病人的身体和精神负担,迫切地需要建立有效的原发性肝癌的筛查方案。肿瘤的筛查最简单实用的方法就是进行肿瘤标志物筛查。肿瘤标志物是癌细胞产生和释放的某些物质,常以抗原、酶、激素、代谢产物的形式存在于肿瘤细胞内或宿主体液中,根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。理想的肿瘤标记物应具有高特异性,适于人群普查。肿瘤标志物的血清学筛查可以简便的诊断癌症。就肝癌而言,甲胎蛋白(AFP)仍是特异性最强的标志物和诊断肝癌的主要指标。现已经广泛用于肝细胞癌的普查、诊断和判断治疗效果、预测复发。正常***血清中AFP含量很少,高于20ng/ml 就有患肝肿瘤的可能,因此,检测痕量AFP具有重要意义。基于同样的原因,我们对HIV的早期筛查进行了思考。获得性免疫缺陷综合征(Acquired immune deficiencysyndrome)简称艾滋病(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(Human immune deficiencyvirus,HIV)感染所引起的一种严重的传染性免疫缺陷性疾病。据卫生部统计,截至2010年10月底,我国累计报告艾滋病病中文摘要毒感染者和病人37万多例,其中病人13万多例,死亡6万8千多例。局部地区和特定人群疫情严重,并逐渐由高危人群向一般人群扩散,防治形势非常严峻。由于HIV病毒具有高突变性的特点,目前尚无有效的预防疫苗和根治艾滋病的药物,预防感染成为控制HIV蔓延的主要手段,而HIV感染的实验室诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分,因此建立敏感实用的检测方法用于监测、诊断或血液筛查,对控制艾滋病的流行显得尤为重要。根据血清学反应不同,HIV可分为HIV-1和HIV-2,其中HIV-1是广泛分布于世界各地,是造成全世界HIV/AIDS流行的主要原因。HIV病毒颗粒呈球形,二十面体立体对称,有gag、pol和env三种结构基因,分别合成核心蛋白(gag)、多聚蛋白(p01)、包膜蛋白(env)三种结构蛋白。HIV变异性很强, 各基因的变异程度各不同,其中env基因变异率最高,gag和pol基因相对保守。 p24蛋白包被在病毒核酸外面,构成病毒核衣壳的外壳,由gag基因编码前体蛋白,在pol基因编码的蛋白酶的加工下产生,因此p24蛋白氨基酸顺序高度保守, 这使其在HIV感染的检测中显示出良好的规律性。p24抗原出现于HIV感染的早期,比抗体出现的时间要早,这是由于急性感染以后病毒发生了爆发性复制, 与具有高度传染性的病毒血症相关联。对HIV p24蛋白进行早期检测在HIV早期感染检测、血液筛查、新生儿HIV感染的诊断和监测治疗的效果和病程的进展方面具有重要意义。但是HIV急性感染期后,体内出现特异性抗体,p24抗原与抗体形成免疫复合物,游离抗原浓度很低,常规方法无法检出,因此需要开发新的高敏感性方法,以便在低浓度情况下直接检出p24抗原。由以上分析可以得出,对AFP和HIV p24抗原进行痕量检测具有重要的意义,也成为临床检验诊断学研究的热点。近年来,免疫分析技术由于具有高灵敏度和高特异性,引起了研究者的兴趣。免疫分析技术是实现肿瘤和传染病快速诊断的重要手段,通过获取某种疾病的特异性“诊断蛋白”(diagnosticprotein,DP,即抗原/抗体)含量和种类,综合分析可方便了解病情。近年来,免疫分析方法得到了长足的发展,建立了多种 11 硕士学位论文灵敏、高效的免疫分析方法,如凝集反应、荧光免疫测定技术(FIA)、放射免疫分析技术(RIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫印迹(WB)、化学发光免疫分析技术、电化学发光免疫分析技术、免疫芯片、免疫组织化学等, 并且在许多临床疾病诊断中得到了广泛的应用。这些方法极大的促进了临床免疫项目的更新和检测的自动化、智能化以及网络化,但是仍然有许多不足:放射免疫技术是以放射性核素作为示踪元素的一种免疫标记测定技术,伴有不同程度的放射性污染;免疫印迹检测过程需要对蛋白质电泳分离,过程繁琐复杂, 耗时较长;免疫组织化学需要借助显微镜的观测且制备繁琐;化学发光和电化学发光需要昂贵的仪器,成本较高;其他如凝集反应、胶体金免疫技术等其特异性和敏感性低,且不能准确定量。基层医疗机构尤其是偏远地区受到条件限制,特别是在急诊手术前需要