文档介绍：分子克隆工具酶 (2)
基因工程的操作，是在分子水平上的操作，是依赖一些酶(如限制性核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶等)作为工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作。所以把这些酶称之为“工具酶”。
工具酶是对野生菌株（或真核生物如酵母）进行改造、优化、而产生的生物工程产品。
分子克隆工具酶
工具酶
核酸内切酶
核酸外切酶
DNA连接酶
DNA聚合酶
DNA及RNA修饰酶
单链核酸内切酶
酶
主要用途
限制性核酸内切酶
识别DNA特定序列，切割DNA分子
DNA连接酶
连接两个DNA分子或片段
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 或Klenow酶
1 制作DNA探针；2 合成cDNA第二链；
3 填补双链DNA 3`凹端；4 DNA测序。
Taq DNA 聚合酶
聚合酶链式反应（PCR）
多核苷酸激酶
多核苷酸5`-OH磷酸化，制末端标记探针
末端转移酶
使3`-末端加同聚物尾
S1核酸酶
降解单链DNA或RNA
DNA酶Ⅰ
在双链DNA上产生随机切口
RNA酶A
降解RNA
逆转录酶
补平反应，合成cDNA或制探针
磷酸酶
切除核酸末端磷酸基
SUMMARY
1 限制性内切酶
引言--核酸酶和限制性核酸内切酶的定义
限制性核酸内切酶的命名
限制性核酸内切酶的分类
限制性核酸内切酶活性及其影响因素
核酸酶（Nuclease）：
通过切割相邻两个核苷酸残基之间磷酸二酯键，导致核酸分子多核苷酸链水解断裂的蛋白酶。
1）按作用对象可分为:
Deoxyribonuclease (DNAase) & Ribonuclease (RNAase)
2）按水解断裂核酸分子不同方式可分为：
Endonuclease & Exonuclease
引言--核酸酶和限制性核酸内切酶的定义
限制性内切核酸酶（restriction endonuclease):
指一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在识别序列内或附近特异切割双链DNA的核酸内切酶。
限制酶天然存在于细菌体内，与相伴存在的***化酶共同构成细菌的限制-修饰系统（Restriction-Modification System)。
EcoR I
Escherichia
属名
Coli
种名
Ry13
株系
编号
若种名头2个字母相同则其中一个可用种名的第一和第三个字母。

限制性核酸内切酶的分类
Ⅰ 型限制性内切酶
Ⅱ 型限制性内切酶
Ⅲ 型限制性内切酶
Ⅰ型限制性内切酶
功能：限制、修饰
特点：需Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸为辅助因子；识别位点和切割位点不一致，没有固定切割位点（随机性）；
应用：不常用。