文档介绍：第一军医大学
硕士学位论文
鼻咽癌细胞肝转移亚群的筛选及基因表达谱分析
姓名:韩春
申请学位级别:硕士
专业:病理与病理生理学
指导教师:姚开泰
20060603
鼻咽癌细胞肝转移亚群的筛选及基因表达谱分析硕士研究生:韩春姚开泰教授导师:摘要群,为研究肿瘤的定向转移提供更为纯净的研究对象。鼻咽癌琋俏夜戏郊岸涎堑厍<恶性肿瘤之一,严重危害着我国人民的健康。研究表明,鼻咽癌在发病机制方面与以下三个因素混合作用有关,即病毒的感染、环境致癌物以及遗传特质有关。临床上鼻咽癌大部分表现为低分化鳞癌,这种组织学特性使得鼻咽癌成为头颈部恶性肿瘤中远处转移率最高的肿瘤之一,多数病人早期就诊时就已伴有颈部淋巴结转移。晚期常见的骨转移和肝转移,是导致鼻咽癌患者死亡的主要原因。目前放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段,但是鼻咽癌患者的五年生存率仍低于%,尸检结果显示有相当多的患者是死于未能诊断的肝转移。因此,建立鼻咽癌细胞肝转移亚群、探讨鼻咽癌肝转移的分子机制、建立可视化的鼻咽癌肝转移动物模型,对了解鼻咽癌肝转移的发展规律、寻找针对性治疗的治疗方法以及药物筛选等都将具有重要意义。肿瘤并不是一个均一的整体,是由各种不同转移潜能的细胞亚群构成的。肿瘤的转移是一个复杂的过程,转移的发生发展是宿主因子与恶性肿瘤细胞内在的特性相互作用的结果,是一个高选择性的过程,只有具有转移潜能的细胞亚群才能发生转移。肿瘤的定向转移是指,特定的肿瘤能够向特定的器官转移,是转移的肿瘤细胞与特定的器官微环境相互作用的结果。根据肿瘤转移的这一特性,有不少研究人员实验性的施加选择压力,分离出适宜特定器官微环境的肿瘤转移亚基因芯片际跏腔诤怂崽秸牖ゲ乖咏坏脑矶7⒌囊恢硕士学位论文
检测基因表达水平的新技术。它具有灵敏度高、检测量大等优点,可同时检测成千上万个基因的表达情况或平行对比这些基因在不同样本中的表达,被认为是一种高通量检测基因表达水平的方法。因此,基因芯片技术可以成为探讨肿瘤转移肿瘤组织或肿瘤细胞原位种植到免疫缺陷的动物体内,能够很好的模拟肿瘤在体内的生长、侵袭、转移过程,复制出与患者十分接近的临床特征,为研究肿瘤的狧—的基因表达谱差异恐晗赴馗次ü臣蒲Х治觯的分子机制的主要手段。肿瘤细胞原位移植技术的出现,极大的推动了肿瘤动物模型的发展。将人类发生发展、转移以及开展实验性的治疗干预,提供了良好的研究对象。近年来新兴的肿瘤分子成像技术,使人们能够在活体动物体内观察肿瘤的侵袭转移过程,提高人们对微小肿瘤和肿瘤微转移的认识。绿色荧光蛋白珿惴河τ糜诳墒踊锬P偷难芯浚沟萌嗣强梢栽诨钐遄刺下观察肿瘤的演进规律,极大地推动了肿瘤的早期生长、发展规律的研究,有效的弥补了人体肿瘤仅能通过活检、手术标本和尸检等进行分析的不足。本实验通过对已标记娜吮茄拾└咦R葡赴——进行裸鼠体内连续传代,人为地施加选择压力,成功的建立了人鼻咽癌细胞肝转移亚群狧—。通过体内体外实验证明其转移能力明显高于母系,并且有明显的肝转移倾向。我们利用基因芯片技术比较了两株细胞狤得了霰泶锊钜炝奖兑陨系幕颉6哉个差异表达基因进行生物学功能分类、文献调研以及基因功能分析,找到了个与肿瘤肝转移相关的基因。通过聚类分析发现,这个基因能够很好的区分人鼻咽癌高转移细胞株狤和人鼻咽癌细胞肝转移亚群狧—。现简述如下:└巫移灶,取肝转移瘤组织进行体外扩增培养后,再注射至裸鼠脾脏。经过奶内筛选,获得了肝转移率高的人鼻咽痛细胞肝转移弧系狧—。通过运动实验、侵袭实验、同质黏附实验、异质黏附实验等体外实验将两株细胞进行比较,发现人鼻咽癌细胞肝转移亚群狧—的运动性、侵袭性均比母系狤浚——狤耐署じ浇档停熘署じ皆龈撸庑┒贾っ髁中文摘要
我们利用整体荧光成像系统一鄄熘琢鱿赴纬筛巫R圃畹氖间和数量,发现狤纬筛巫R圃畹氖奔涑な可偾野樗嬗写罅康母骨蛔发肿瘤。将狧—形成的肝转移瘤进行病理切片检查及免疫组化染色,芯片个己知功能基因咏唬恐晗赴馗次。再利用该公司配套的“基因芯片检测工作站”对芯片进行扫描,,霰泶锸窍碌鞯模绻趸饷、掠蔚骺鼗等。同时利用软件进行文献调研,找到了个有文献报道与肝转移有关软件进行聚类分析,发现二者聚类结果一致,能够很好的区分人鼻咽癌细胞肝转转移相关的基因进行聚类分析,发现仍然能够很好的区分两株细胞。—狤哂斜绕淠赶蹈康亩裥员硇汀L迥谑笛榻峁允—狤哂忻飨缘南蛟嘧R频那阆颉=柚琢鱿赴泶顴奶氐悖移灶,肝转移率仅为%;而狧—形成肝转移灶的时间短、数量多且未见腹腔其它脏器转移灶,肝转移率可达到ァ2捎肞及对体外扩增培养的人鼻咽癌细胞肝转移亚系狧—进行人渭测,结果均为阳性,证实了—是人源性的肿瘤细胞而非裸小鼠的自证明为低分化鳞状细胞癌。以上结果显示,已筛选出