文档介绍：南方医科大学
硕士学位论文
鼻咽癌肝转移相关基因的筛选及其功能的初步鉴定
姓名:刘芳
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:姚开泰
20090527
鼻咽癌肝转移相关基因的筛选及其功能的初步鉴定硕士研究生:刘芳指导教师:姚开泰教授摘要床上有一半以上的鼻咽癌患者确诊时已出现了颈部淋巴结转移及远处转移。晚期鼻咽癌患者主要出现肝转移和骨转移,这是导致患者死亡的主要原因。尸检资料显示相当多的鼻咽癌患者死于肝转移。因此阐明鼻咽癌肝转移的分子机制,筛查鼻咽癌肝转移相关基因,从而对鼻咽癌肝转移进行干预,这将对临床治疗有重要的肿瘤转移的发生是宿主与恶性肿瘤细胞相互作用的结果,是个高选择的过程,只有具有转移潜能的细胞亚群才能发生转移,并且转移的肿瘤细胞具有一定的组织倾向性。因此分离并鉴定出具有不同转移方向的肿瘤细胞亚克隆,有或负性调控因素,对于早期预测和诊断肿瘤转移有重要意义。本实验前期通过利用鼻咽癌细胞株瓻闶笃⒃嘟又址ㄌ迥谏秆〉到肝转移细胞亚系瓾⒗们捌谛酒秆〕龅代细胞中表达差异以上的基因觥F渲龌蛟诟巫R蒲侨褐斜泶锷系鳎个基因表达下调。通过对个表达上调基因进行文献调研并结合软件,我们发现、等基因与肿瘤的转移密切相关。为易逍恐傅鞍鬃B家蜃樱芤种颇谠葱訣钙粘蛋白的表达,引发椅M肪辈堪┝馨妥R频谋昵┗颍梢宰魑6裥灾琢霾ド⒌谋曛尽研究表明,该基因与能够促进乳腺癌、大肠癌、肺腺癌、卵巢癌、食管癌等多硕士学位论文鼻咽癌琋俏夜戏匠<亩裥灾琢觯意义。针对性的比较同一亲本来源、不同转移潜能的细胞系,寻找与转移相关的正性
种肿瘤的侵袭和转移。妊芯糠⑾掷肦碌鱏梢缘贾律窬母细胞瘤的侵袭和转移能力下降。V琢龌邓酪蜃佑盏嫉鞍祝且恢中恐附峁沟鞍祝ü种葡赴凋亡,参与肿瘤的恶性进展过程。研究表明,该基因在头颈部癌淋巴结转移中高表达,并且为头颈部癌淋巴转移的标签基因。等通过对其之前建立的畂系统进行改进,改变系乃母霭被幔’端接上一个核定位信号,构建成反义四环素激活子,,调节质粒包含一个四环素调控的反式激活子,反应质粒含有目的基因,并受四环素反应元件牟僮荩琓含有操纵基因的个碱基的握蛑馗葱蛄校纳舷掠胃饔幸桓鯟的最低限度启动子系统特异性强,具有严密的开关调控,在无诱导时,目的基因背景表达低甚至不表达,因此畂低吃谏蒲Я煊蛴τ酶7奖恪本课题的研究目的是筛选与肝转移相关的基因并进行初步的验证,为深入研究鼻咽癌肝转移的分子机制及鼻咽癌肝转移的早期诊断和治疗提供理论依本课题进行了如下研究:本实验利用软件对前期芯片数据个肝转移细胞亚系表达上调基因进行肿瘤转移相关性分析,并结合文献调研,发现、等基因与肿瘤的转移密切相关。..中各基因的表达情况。结果显示:在狧蠸的表达分别是丁倍、,ü徊轿献调研发现:M肪辈堪┝馨妥R频谋昵┗颉R虼耍狙中文摘要畂虮泶锏骺叵低呈荕,。鼻咽癌肝转移相关基因筛选椒ń醒橹ぃ、
究选取Q芯慷韵螅捎肦睿云谌范ㄉ綪瓾../及瓾烈畇细胞诱导前比较,采用猳骺叵低常菇苏攵园谢騎的疉刈樵靥虺聊员茄拾┫赴巫R粕镅匦缘挠跋Sτ妹盖屑ê托蛄蟹治龇椒ㄑ橹ず螅弥侍遄H炯际踅癟载体导入瓾赴堰拭顾秆』得抗性克隆,な低庠碊已整合到细胞基因组校ü舛縍甈结果表明,泶镌靥寰璂盏∈焙竽芴异性的引起靶基因谋泶锵碌鳎扇判士纱锏ィ徊剑琖分析表明整合畇的细胞经盏己蟮鞍妆泶锵碌鞔锏%,表明我们已成功地建立稳定转染籹的瓾赴赖关系,F桨蹇寺⌒纬墒匝橄允../.。利用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,,表明泶锍聊笙赴鲋郴郝W凵辖峁砻鱐表达下调后,鼻咽癌细胞体外生长被显著抑制。体外侵袭小室检测虮泶锍聊笙赴窒芰Φ母谋洌峁示,与狧——/及狧疶一赴盏记氨冉希通过皮下成瘤实验观察虮泶锍聊蠖员茄拾┫赴迥谠鲋衬力的影响。结果显示经盏糡基因表达沉默后,显著抑制了鼻咽硕士学位论文在鼻咽癌肝转移过程中的作用。采用ḿ觳釺下调后细胞的体外增殖情况,结果显示,,并且呈时间依狧疶一赴璂诱导虮泶锍聊螅赴袭能力显著降低,得鱐表达沉默抑制了鼻咽癌细胞的体外侵袭能力。瓾疶.
癌细胞体内增殖能力。进一步通过脾脏接种法,观察虮泶锍聊对细胞体内侵袭、转移能力的影响。,嘌呤霉素筛选获得抗性克隆,な低庠碊已整合到细胞基因组小时后能特异性的引起靶基因的表达下调,干扰效率可达到%,%,表明我们已成功地建立稳定转染.——细../及瓾疭畇细胞诱导前比较,瓾疭.