文档介绍：. -
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质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定
一、实验目的
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二、实验原理
(多聚酶链式反应)
在DNA聚合酶催化下，可以DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以dNTP为原料，通过变性、退火、延伸等步骤， 在体外（缓冲液中）复制DNA，使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。
PCR一次循环的具体反应步骤为：
：加热反应系统至95℃，使模板DNA在高温下完全变性，双链解链 。
：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。
：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
(1).碱裂解法：
染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异：
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，染色体DNA和质粒DNA均变性；
，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，可通过离心形成沉沉淀去除。
(2).离心层析柱：
、低pH值状态下可选择性地结合溶液中的质粒DNA，而不吸附溶液中的蛋白质和多糖等物质；
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，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
质粒DNA的定量分析（紫外分光光度法）：
，且其对光的吸收是具有选择性；
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DNA分对波长260nm的紫外光有特异的吸收峰
蛋白质对波长280nm的紫外光有特异的吸收峰
碳水化合物对230nm的紫外光有特异的吸收峰
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