文档介绍：实验一、 紫外 - 可见分光光度法的应用
一． 目的要求
1. 掌握紫外 - 可见分光光度计的原理及其可分析物质的结构特征，学会紫外 - 可
见分光光度计的的使用方法；
2. 掌握紫外 - 可见分光光度计性能的检验方法
3. 学会制作吸收曲线和标准曲线，能正确选择合适的测定波长，并对未知浓度
的溶液进行测定；
4. 掌握双波长测定物质的方法；
5. 了解运用紫外 - 可见分光光度法分析未知化学物质的思路；
6. 学会用解联立方程组的方法同时分别测出吸收曲线相互重叠的二元混合物含
量。
二． 实验原理
紫外 - 可见分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因
此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。
根据比尔定律，某有色溶液的光密度 D 与其浓度 C 成正比，即 D=KC 。
当溶液浓度以百分浓度为单位，且液层厚度为 1 cm 时， K 称为该物质的比吸收
系数。
叶绿素的双波长定量测定： 是根据叶绿素对某一特定波长的可见光的吸收， 用公
式计算出叶绿素含量。 此法精确度高， 还能在未经分离的情况下分别测出叶绿素
a 和叶绿素 b 的含量。
欲测定叶绿体色素混合提取植中叶绿素 a 和叶绿素 b 的含量，只需测定该提
取物在某一定波长下的光密度 D ，并根据叶绿素 a 、叶绿素 b 在该波长下的吸收
系数即可求出叶绿素的浓度。 为了排除类胡萝卜素的干扰， 所用的单色光应选择
叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素 a 和叶绿素 b 在红光区的最大吸收峰分别位于 663nm 和645nm，
又知在波长 652nm 下，叶绿素 a 和叶绿素 b 的80% 丙酮溶液的比吸收数分别为
，而在波长 645nm 下，分别为 。 据此可列出光密度 D
与浓度（单位 mg/l ）的下列关系式：
D663 = a + b ( 1)
D645 = a+ b (2)
解方程式（ 1) 、(2) 得：
Ca = 663 - 645 (3)
Cb =- 663 I (4)
将Ca 和Cb相加，即得叶绿素总量 C T， 即：
I