文档介绍：淮阴工学院毕业设计( 论文) 开题报告学生姓名: 严闯学号: 1121602115 专业: 生物工程论文题目: Trichoderma asperelloides 原生质体的制备与再生研究指导教师: 方芳 201 6年2月 13日毕业论文开题报告 1. 结合毕业设计( 论文) 课题情况, 根据所查阅的文献资料, 每人撰写 200 0 字左右的文献综述文献综述 1引言原生质体概念:用水解酶将细胞壁水解剥离, 剩下由原生质体膜包围着的原生质体部分称为原生质体( protoplast )。其形状随不同菌类而异。原生质体基本保持原细胞结构、活性和功能,只是因为去掉了细胞壁,对渗透压和外界环境特别敏感。为制备原生质体,必须有效地除去细胞外的细胞壁。去壁的方法有机械法、非酶分离法和酶法。实际工作中绝大多数采用酶法,时间短,效果好。即用水解酶除去细胞壁, 释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体的过程。不同微生物种类其细胞壁结构和化学组成不同,酶解处理的有效酶也不一样,因此要根据微生物种类特性选择合适的酶。本次实验是针对 Trichoderma asperelloide 的, 所以选取的是蜗牛酶,溶菌酶,纤维素酶[1]。 Trichoderma asperelloides 是从棘孢木霉中分出的新种,它与木霉属、曲霉属等形态学基本没有区别,但分子序列标记不同。目前国内少见该菌种的报告,但是有关该菌种产纤维素酶的报道。研究表明该菌种能较好地利用农业废弃物为底物生产纤维素酶, 并利用紫外、微波对该菌株进行了复合诱变,选育出一株产酶活力高的突变菌株 Trichoderma asperelloides ZWWB1 。但是影响纤维素酶产量和活力的因素,除菌种外, 还有发酵基质、温度、 pH 、水分及发酵时间等;同时还有纤维素酶的生产方式。另外 Trichoderma asperelloide 是一种广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤的一个常见菌种。 Trichoderma asperelloide 是重要的发酵工业菌种,在工业酶制剂、有机酸发酵方面被广泛应用,此菌有很强的纤维素霉及纤维,二糖淀粉酶等,它能利于农副产品,如麦杆,木材,木屑等纤维素原料,使之转变为糖质原料[2]。因此采用各种方法对 Trichoderma asperelloide 进行菌种改良以提高目标产物的产量及质量是一直被科学家研究的方向。本课题研究的是 Trichoderma asperelloide 原生质体的形成率和再生率, 通过改变酶解温度、裂解酶组成比例对原生质体的形成、再生进行了初步研究。 原生质体及 Trichoderma asperelloide 的主要特性 原生质体的主要特性 . 1原生质体的定义原生质体( protoplast )是指脱去细胞壁的细胞,是一生物工程学的概念; 动物细胞也可算做原生质体。原生质体是组成细胞的一个形态结构单位。原生质体由原生质分化形成,具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。原生质体是细胞进行各类代谢的主要场所,是细胞中重要的部分[3]。 . 2原生质体的特性原生质体指在人为条件下,去除原有细胞壁或抑制新生细胞壁后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状对渗透敏感的细菌。革兰阳性菌最易形成原生质体。原生质球指革兰阴性菌肽聚糖层受损后尚保留有外膜的原生质体。原生质体,它是细胞进行各类代谢的主要场所,是细胞中重要的部分。原生质体可分为质膜、细胞器、胞基质三部分[4]。 . 3原生质体制备基本方法现在较成熟高效的方法是酶解法。将一定量的纤维素酶、蜗牛酶及溶菌酶溶于渗透压稳定剂,充分振荡溶解后, 3000r/min 离心 15 min , μm滤膜过滤除菌;配制成 %纤维素酶+ %蜗牛酶+ %溶菌酶的混合酶液。低温保存待用[5]。 . 2 Trichoderma asperelloide 主要特性 . Trichoderma asperelloide 的特性 Trichoderma asperelloide 是从棘孢木霉中分出的新种,广泛存在于不同环境条件下的土壤中。自 19世纪中叶,人类对棘孢木霉菌已有了初步的认识,但直到上世纪 60 年代木霉菌的分类地位才得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质,比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物,并能提高农作物的抗逆性,促进植物生长和提高农产品产量,因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂[6]。 . Trichoderma asperelloide 的选择本次实验选取的是本校实验室分离纯化的木霉菌种,经过在培养基上接种,恒温培养箱中