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Promocell原代细胞培养实验.ppt

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Promocell原代细胞培养实验.ppt

上传人:sanshenglu2 2021/9/18 文件大小:1.16 MB

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Promocell原代细胞培养实验.ppt

文档介绍

文档介绍:Promocell原代细胞培养实验
Cytokines
Antibodies
ELISAs
Cell Assays
Transfection Reagents
Human Cells
Optimized Media
Classical Media
Sera
Cell Culture Reagents
Cell Culture
Cell Biology
Training Courses
Three PromoCell Brands
Cell Culture
Molecular Biology
Quality Management
Promocell原代细胞培养实验
1990年开始科学家指导科学家
用“技术”取代“经验”
用“经验”取代“运气”
Promocell原代细胞培养实验
细胞培养中产生问题的可能原因
Promocell原代细胞培养实验
微生物污染 (I)
细菌污染
培养基浑浊
培养基变黄(pH值改变)
显微镜下:移动的黑点或杆状物
大小:1-5µm
来源:操作人员/水浴
不能再进一步培养 丢弃!
Promocell原代细胞培养实验
真菌污染
培养基变黄(pH值改变)
生长相对缓慢
来源:气流
显微镜下:
菌丝体—主要是植物式的生长模式
分枝菌丝—菌丝体,孢子生产能力强
不要打开培养容器,直接丢弃!
微生物污染 (II)
Promocell原代细胞培养实验
酵母菌污染
培养基呈云雾状
椭圆形,酵母细胞芽接,成链
大约3-5µm
来源:气流
可以用抗真菌药剂清除(如两性霉素B和制霉菌素)
微生物污染 (III)
Promocell原代细胞培养实验
支原体污染
首次发现于1898年,被定义为病毒
是已知的能自我复制的最小原核生物
直径为能够通过孔径为的纤维素和聚乙烯醇过滤器(由于其变形的能力,甚至能够穿过宽的孔径!)
缺乏细胞壁肽聚糖耐青霉素
一般在培养中无明显的表象(肉眼不可见,显微镜下也不可见
一般发生在胞外,只有极少数几率发生在胞内
微生物污染 (IV)
Promocell原代细胞培养实验
微生物污染 (IV)
HK-2细胞
(人肾近曲小管上皮细胞)
复苏后细胞第一天贴壁,但细胞中可见空泡样改变
然后传代后出现明显生长迟缓
空泡增加,继而细胞崩解
培养基是DMEM/F12:10%FBS
冻存液是90%FBS+10%DMSO
Promocell原代细胞培养实验
支原体污染后的表现和肉眼可见特征
即使细胞培养过程中支原体的浓度达到非常高的水平(大于108个支原体/ml),仍然没有任何明显可见的污染征兆
培养基的颜色提前变化(pH值转变)
倍增时间延长
细胞形态改变
细胞表层穿孔
细胞周边不均匀
空泡形成
细胞结构降解
Promocell原代细胞培养实验

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