文档介绍：Promocell原代细胞培养实验
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Promocell原代细胞培养实验
1990年开始科学家指导科学家
用“技术”取代“经验”
用“经验”取代“运气”
Promocell原代细胞培养实验
细胞培养中产生问题的可能原因
Promocell原代细胞培养实验
微生物污染 (I)
细菌污染
培养基浑浊
培养基变黄（pH值改变）
显微镜下：移动的黑点或杆状物
大小：1-5µm
来源：操作人员/水浴
不能再进一步培养 丢弃!
Promocell原代细胞培养实验
真菌污染
培养基变黄（pH值改变）
生长相对缓慢
来源：气流
显微镜下：
菌丝体—主要是植物式的生长模式
分枝菌丝—菌丝体，孢子生产能力强
不要打开培养容器，直接丢弃！
微生物污染 (II)
Promocell原代细胞培养实验
酵母菌污染
培养基呈云雾状
椭圆形，酵母细胞芽接，成链
大约3-5µm
来源：气流
可以用抗真菌药剂清除（如两性霉素B和制霉菌素）
微生物污染 (III)
Promocell原代细胞培养实验
支原体污染
首次发现于1898年，被定义为病毒
是已知的能自我复制的最小原核生物
直径为能够通过孔径为的纤维素和聚乙烯醇过滤器（由于其变形的能力，甚至能够穿过宽的孔径！）
缺乏细胞壁肽聚糖耐青霉素
一般在培养中无明显的表象（肉眼不可见，显微镜下也不可见
一般发生在胞外，只有极少数几率发生在胞内
微生物污染 (IV)
Promocell原代细胞培养实验
微生物污染 (IV)
HK-2细胞
(人肾近曲小管上皮细胞)
复苏后细胞第一天贴壁，但细胞中可见空泡样改变
然后传代后出现明显生长迟缓
空泡增加，继而细胞崩解
培养基是DMEM/F12：10%FBS
冻存液是90%FBS+10%DMSO
Promocell原代细胞培养实验
支原体污染后的表现和肉眼可见特征
即使细胞培养过程中支原体的浓度达到非常高的水平（大于108个支原体/ml），仍然没有任何明显可见的污染征兆
培养基的颜色提前变化（pH值转变）
倍增时间延长
细胞形态改变
细胞表层穿孔
细胞周边不均匀
空泡形成
细胞结构降解
Promocell原代细胞培养实验