遗传对他莫昔芬浓度和乳腺癌易感性的影响.pdf

文档介绍：上海交通大学医学院硕士研究生毕业论文( 2010 ) 遗传对他莫昔芬浓度和乳腺癌易感性的影响摘要他莫昔芬( tamoxifen ,TAM )是目前广泛用于雌激素受体( ER )阳性的乳腺癌患者的预防和治疗的固醇类抗雌激素药物。由于他莫昔芬个体间生物利用度差异较大,而且有报告指出其对患者具有明显的副作用, 给临床个体化用药带来较大困难。尤其是不同个体在口服相同剂量的他莫昔芬后,血药浓度的差异非常大,这提示其主要药物代谢基因 CYP3A5 和 CYP2D6 基因型的差异可能是其血药浓度的影响因素之一。 CYP2E1 酶主要参与激活小分子致癌物如苯、四***化碳和亚硝***等,同时参与酒精的氧化代谢和产生自由基而启动脂质过氧化,所以,乳腺癌易感性与 CYP2E1 基因型的相关性也具有一定的研究意义。本课题的目的在于采用聚合酶链式反应方法( PCR )对人体细胞色素 P 450 酶系的 CYP3A5 *3 、 CYP2D6 *10 位点进行基因分型,并应用高效液相色谱- 质谱联用(LC-MS/MS) 方法测定乳腺癌患者体内他莫昔芬及其活性代谢物 4-羟基他莫昔芬( 4-hydroxytamoxifen ,HTAM )的血药浓度, 再采用统计学方法分别分析各种基因型对他莫昔芬血药浓度的影响,为临床合理个体化用药提供理论依据。并在健康人群中和乳腺癌患者中分上海交通大学医学院硕士研究生毕业论文( 2010 ) 别测定 CYP2E1 基因型,从而探讨 CYP2E1 基因多态性与乳腺癌易感性之间的关系。第一部分: CYP3A5 *3 、CYP2D6 *10 基因型测定的方法学研究目的: 建立测定乳腺癌患者的 CYP3A5*3 和 CYP2D6*10 的基因多态性的方法。研究方法: 采用苯酚- ***仿法对 30 例乳腺癌患者的血液标本进行基因组 DNA 的提取,并用 PCR 方法对基因组 DNA 标本进行基因检测,再通过凝胶电泳实验进行基因分型。结果: 30 例乳腺癌患者中, CYP3A5 基因型*1/*1 型 1 例、*1/*3 型 13 例、*3/*3 型 16 例, CYP2D6 基因型*1/*1 型 2 例、*1/*10 型 18 例、*10/*10 型 10 例。结论: 本研究建立的测定乳腺癌患者的 CYP3A5 *3 、CYP2D6 /*10 基因型的方法是稳定、特异的。第二部分:他莫昔芬及 4- 羟基他莫昔芬血药浓度测定的方法学研究目的: 建立测定他莫昔芬及其活性代谢物 4- 羟基他莫昔芬血药浓度的方法。研究方法: 采集 30 例乳腺癌患者空腹服药 10mg 、 2h 后的血浆标本,对血浆标本进行萃取,采用内标法并应用高效液相色谱- 质谱联用(LC-MS/MS) 方法,测定他莫昔芬( TAM )及其活性代谢物 4- 羟基他莫昔芬( HTAM )的血药浓度。结果: 血浆中 TAM 和 HTAM 浓度分别在 10 ~ 500 ng/mL , 1 ~50ng/mL 范围内线性关系良好; TAM 和 HTAM 的回收率分别在 ± ~ ± 和 ± ~ ± 之间, CV 分别 %~ %和 %~ %之间。结论: 本研究建立的测定他莫昔芬及其活上海交通大学医学院硕士研究生毕业论文( 2010 ) 性代谢物 4- 羟基他莫昔芬血药浓度的方法是稳定、快捷、有效的。第三部分: CYP3A5 和 CYP2D6 基因多态性与他莫昔芬及其活性代谢物 4- 羟基他莫昔芬血药浓度的相关性研究目的: 研究 CYP3A5 和 CYP2D6 基因多态性对乳腺癌患者体内他莫昔芬及其活性代谢物 4- 羟基他莫昔芬血药浓度的影响。研究方法: 采用 PCR 方法测定 CYP3A5 和 CYP2D6 基因型,采用高效液相色谱- 质谱联用(LC-MS/MS) 方法测定 TAM 和 HTAM 的血药浓度,使用统计学方法比较其相关性。结果: 30 例乳腺癌患者血浆中 TAM 和 HTAM 浓度分别在 ~391 ng/mL 和 ~ 之间。 CYP3A5 基因型与乳腺癌患者体内 TAM 的浓度差异具有统计学意义, 比较发现*1/*1 和*1/*3 组的 TAM 的浓度值( ± )明显低于*3/*3 组( ± ) ( P< ) , CYP2D6 基因型与其活性代谢物 HTAM 的浓度差异具有统计学意义,三组之间两两比较发现*1/*1 和*1/*10 两组 HTAM 的浓度值( ± , ± )都明显高于*10/*10 组( ± ) ( P< )