文档介绍：纤溶酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达指导教师:朱宝成教授学位类别:理学硕士学位申请人:郭妍妍郭晓军讲师学科专业:微生物与生化药学授予单位:河北农业大学答辩日期:二。一一年六月四日分类号:密级:公珏单位代码:.学号:墨鱼玪
玲蛾蛹学位论文作者签名:勿&讦妍独创性声明学位论文版权使用授权书年∥月多日发表或撰写过的研究成果,、招┨没蚱渌逃沟难加¨年日本学位论文作者完全了解洹佰招┨糜泄乇A簟⑹褂醚宦畚牡墓娑ǎ阅。本人授权通佰招┨每梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨年日签字日期:伊本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签字日期:有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者签名:导师签名:学位论文作者毕业后去向:工作单位:通讯地址:电话:邮编:
所包含的锌蛋白酶家族结构域蛄形猇删挥蟹⑸谋洹痩摘要血栓性疾病已成为常见病和多发病,列致残和致死病因的第一位,严重影响人类生存质量和寿命,针对溶栓药物的临床应用要求,研发特异、高效、安全、价廉的纤溶酶类溶栓药物具有广阔应用前景。运用分子生物学技术和基因工程技术,将现有溶栓药的优点集合起来,设计出完美的溶栓药将是国内外的研究热点,同时,开发新型天然来源溶栓药和探索新型结构溶栓药将是今后研究方向。假蕈状芽孢杆菌纤溶酶是土壤中分离得到的一种新型纤溶酶,基因全长渲为成熟肽基因,据报道基因全长编码成熟肽之前的序列虺の赡苡氲骺赜泄兀A私徊教教种涞墓叵担捶治銮岸诵蛄械作用及是否与活性有关,所以本工作进行了成熟肽基因的克隆与表达研究,并且为了将来的生产和研究摸索了其在毕赤酵母中的表达研究,主要研究内容如下:结合本实验室对假蕈状芽孢杆菌纤溶酶的报道,分析其基因序列,设计合成一对含蚗盖形坏愕囊铮┰龅玫较巳苊赋墒祀幕騁,使用和双酶切表达载体拖巳苊赋墒祀幕颍ü庸菇酥刈橹柿萌燃ぷ;ㄗ;拗骶鶧蟛庑颉2庑蚪峁砻鳎迦胄蛄谐嗦个氨基酸,与蠦墒祀牡序列一致。将重组质粒;蟪Ω司拗骶鶥晒竦胮/工程菌。终浓度为/腎盏急泶铮璖—检测表达的融合蛋白表观分子量约为,与理论值一致。诱导菌体超声破壁后用纤维蛋白平板法检测表达产物具有纤溶酶活性,并进一步镍柱亲和层析获得纯化,纯化产物有纤溶酶活性。由此说明基因全长编码成熟肽之前的序列在原基因组序列中起调控作用,对纤溶酶的活性无直接影响,因此成熟肽部分就表现有纤溶酶活性。为利于外源基因的胞外表达便于工业生产,将纤溶酶全长基因克隆到毕赤酵母中进行初步研究。根据所获得的基因序列和真核表达载体的多克隆位点重新设计含有蚇盖形坏愕囊铮菇ㄖ刈橹柿将重组质粒线性化后,电转化毕赤酵母中构建重组菌株/,经、平板快慢型初筛和友股秆〉玫窖粜宰;辏婕状加盏己螅得到表观分子量为的有纤溶活性的蛋白。镍柱亲和层析纯化后用纤维蛋白平板法检测到纤溶酶活性。本文采用分子克隆及基因重组技术,不但成功表达了纤溶酶成熟肽基因,探讨了纤溶酶的全长基因和成熟肽基因之间的关系,而且纤溶酶全长基因在真核生物毕赤酵母中也得到了有效表达,为基因工程药物的研究开发奠定必要的理论和实践基础。关键词:纤溶酶基因;大肠杆菌;毕赤酵母菌;克隆;表达
瓼,瑂琲,.‘,瓸.,.,.甌、::
猠...;.,..,妇畐.,篺;;籩
录目把浴璴血栓性疾病及危害⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.血栓疾病的治疗及溶栓药物的发展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...Kㄐ约膊〉┪锏姆⒄埂纤溶酶类溶栓剂的来源及研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯....⑸锢丛吹南巳苊浮纤溶酶基因克隆表达的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.大肠杆菌表达系统⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..泶锞辍牧嫌敕椒ā试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..暧胫柿!.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.俨葑囱挎吒司蜃镈的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯