文档介绍：实验三 重组质粒DNA转化大肠杆菌
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实 验 目 的
学****将重组质粒DNA导入大肠杆菌的方法
学****化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法
为下一步重组体筛选做准备
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实 验 原 理
遗传学中转化的基本含义是使细胞获得一新的可遗传的表型性状。分子克隆中用人工的方法将重组质粒DNA导入大肠杆菌细胞，使携带有重组质粒的大肠杆菌获得在抗生素平板上生长的能力，从而与不携带重组质粒的的细菌区分开来，这个过程就是转化。
将重组质粒转化进受体细菌时，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。大肠杆菌细胞经过一些特殊方法（电击法、 CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞即感受态细胞(Competent cells)。
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转化(Transformation)
是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
CaCl2是一种低渗溶液，在0℃低温处理大肠杆菌细胞时，细胞膨胀成球形，DNA可吸附在其表面。在短暂的热冲击（如42 ℃ ）下，细胞可吸收外源DNA。
为了鉴定这些转化子，须利用质粒编码的筛选标记，这些标记赋予细菌新的表型，是成功转化的细菌很容易被筛选出来。pET32a质粒带有氨苄西林抗性基因（Ampr），其重组体转化的大肠杆菌能够在含氨苄西林的培养基上生长，而未转化的受体菌则不能再这种培养基上生长。
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Ampr：氨苄西林抗性基因 – β内酰***酶
多克隆位点（MCS）：外源DN***段的插入位点
Amps菌株
Ampr
涂布于含Amp的培养基上，可以生长。次日可见白色菌落-- 转化子。
培养基上含有X-Gal和IPTG时，可使用蓝白斑筛选方法鉴别真正的重组的转化子。
pET32a
pET32a
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结构的三大要素：
多克隆位点
选择标记（耐药性，LacZ）
复制起始位点
种类：
质粒
噬菌体
酵母人工染色体（YAC）
反转录病毒载体
表达载体等
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pET-32a Vector
The pET System is the most powerful system yet developed for the cloning and expression of recombinant proteins in E. coli.
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pET-32 cloning/expression region
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Vector (pET-32a)
Gene fragment (SmPR10)
pET32a-SmPR10
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