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双向扩散法—抗原分析
【原理】
    双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时，可呈现多条沉淀线以至交叉反响。
【材料】
   生理盐水1%琼脂管〔每管约4ml〕
   载玻片
   打孔器及打孔模板
   微量加样器及塑料吸头
   抗体及抗原1、2、3、4、5、6。
   湿盒
【方法】
1．将已溶化的1%琼脂盐水管放56~60℃水浴箱中平衡温度备用。
2．将载玻片置于水平桌面上，~4ml，。
3．凝固后，将打孔模板置于琼脂板下，然后用打孔器打孔，根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采用三角型，即每一个三角型的三个孔为一组。〔因本次实验所制备的琼脂板均以载玻片为底板故根据其大小只能采用三角型同时每一琼脂板也只能制成两组。否那么，如采用方阵型或梅花型那么因琼脂板边缘琼脂厚度不够而使周边各孔所加抗原或抗体量缺乏或溢出，如制成三角型三组，因各孔相距过近相互渗透扩散而难于正确判定结果〕。
4．用微量加样器加抗体各10μl。各组所余两孔各按抗原1、2为一组，3、4为二组，5、6为三组，分别各参加10μl。注意每加一样品均需更换加样器塑料吸头，以防止交叉现象影响实验结果。
5．作好记录，放湿盒中，置37℃温箱，24小时后观察结果。
【结果】
  说明：
〔1〕融合性沉淀弧，说明两孔中抗原相同，为同一性反响。
〔2〕两沉淀线单独形成并形成交叉，说明两孔中的抗原完全不同，为非同一性反响。
〔3〕融合性沉淀弧出现支线，或同时有另一条或两条沉淀线，说明两孔中抗原有相同局部又有不同局部，此为局部同一性反响。
单向免疫扩散法〔Single radil immunodiffusion〕—正常人群IgG正常值检测
【原理】
    在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中参加定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，既形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测未知标本的抗原浓度〔mg/ml或IU/ml〕。
   应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中IgG、IgA及IgM的含量及正常值。
【材料】
1．示教局部：
   2%离子琼脂或生理盐水琼脂〔内含2‰NaN3〕
   标准马抗人IgG血清〔抗体〕〔北京生物制品研究所生产〕
   参考蛋白工作标准〔北京生物制品研究所生产〕
    PBS
   玻璃板或载玻片。
   打孔器〔孔径3mm〕及打孔模板。
   微量加样器
   湿盒〔容器内加湿纱布或泡沫塑料〕
2．实验局部：
   已制备好的含有马抗人IgG抗体的1%琼脂板。
   1:50稀释的单人份待检血清标本。
   打孔器、模板、微量加样器及湿盒等。
【方法】
〔一〕标准曲线的制备：示教
1．按照玻片的大小，以能制做1~，分装其1/2量的2%盐水琼脂