文档介绍：［实验六细菌的生化试验］细菌的生化实验
实验六细菌的生化试验
目的要求
.通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；
。
操作步骤
一、糖类发酵（分解）试验
原理：细菌含有分解不同蔗糖（醇、甘）类的酶，因而分解各种糖（醇、甘）类的能力也不必一样。有些细菌分解某些糖（醇、甘）产酸（符号：+）、产气（符号：O）,培养基由兰变黄（指示剂澳指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：一），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法
培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白陈水溶液（蛋白陈1g,***化钠 ,水100ml, pH7. 〜1 %的比例分别加入各种辣椒），每 100ml加入1. 2ml的0. 2%澳麝香草酚蓝（或用1. 6%浪甲酚紫酒精溶）作指示剂。分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
〜%,则成半固体，可省去倒立的小失水管。%漠麝香草酚蓝溶液配法：
漠麝香草酚蓝0. 2g
0. IN NaOH 5ml
蒸储水95ml
方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2〜3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法
培养基：
蛋白陈20g
***化钠5g
琼脂1g
%硫甲酚紫酒精溶液1ml
糖10g
硫乙醇酸钠1g
蒸储水1000ml
将陈、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内，加热使融化，再加入所需的糖，,加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。结果观察同需氧菌。
二、V-P试验（二乙酰试验）
原理：某些细菌能从葡萄糖一***酸一乙酰***甲醇（Acetymethyl carbinol） -2, 3-丁烯二醇（2, 3-bytaylene cylycol）,在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰，后者和陈中的胭基化合物起作用，会带来粉红色的化合物。其反应式为：
2CH3H
CH33 十 2C02
***酸乙酰***甲醇
-2H-CH33 K0HCH3H3
3-丁烯二醇丁二***（二乙酰）
培养基：含葡萄糖、K2HP04、蛋白陈各5g,完全溶解于1000ml水中后，分装试管内，间歇灭菌或10磅10分钟灭菌。
方法：
0' Meara' s 法
试剂：40g氢氧化钾溶于100ml蒸于水中,。
将被检细菌接种于葡萄糖蛋白陈水培养后，于35〜37℃培养48小时，,猛烈摇振混合。
Baritt , s 法
试剂：6% a-奈酚酒精溶液为甲液，40%氢氧化钾为乙液。
同上法接种培养霉菌，于2nli培养液内改投甲液1ml和乙液0. 4 毫升，摇振混合。
试验时强阳性者约于5分钟后，可产生粉红色反应（长时间无反应，置室温过夜），次日不变者为基因型。
三、***红（.）试验
原理：某些细菌在糖代谢过程中生成***酸，有的甚至进一步纯化被分解为甲酸、乙酸、乳酸等，而不是生成V-P试验中的二乙酰，从而使培养基的pH下降至4. 5或以下（V-P试验的培养物pH常在 4. 5以上），故加入***红试剂呈长红色。本试验常与V-P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。
培养基：同V-P试验培养基。
***红指示剂：***红溶于300nli95%酒精中，再加入蒸僧
水 200mlo
方法：接种细菌于培养液之中，37℃培养2〜7天后，于培养物中加入几滴试剂，变红色者为阳性反应。
四、淀粉水解试验
原理：细菌如产生淀粉酶可将甲硫氨酸淀粉分解为糖类，在培养基上滴加碘液，可在肉骨粉周围出现透明区。
淀粉琼脂培养基：

无菌羊血清（只对不易生长的细菌才加）5ml
无菌3%淀粉溶液10ml
将琼脂加热融化，冷却到45℃,加入淀粉液体及羊血清，混匀后, 倾注平板。
方法：将细菌划线接种于上述平板上，在37℃培养24小时。生长后取出，在菌落处滴加革兰氏碘液少许，观察。
结果：培养基呈深蓝色，能水解淀粉的细菌及其菌落周围有透明的环。
五、枸椽酸盐利用试验
原理：当细菌利用锈盐作为独一无二氮源，并利用枸椽酸盐作为唯一碳源时，可在枸椽酸盐培养基上为生长，生成碳酸钠，并同时利用钱盐生成氢，使培养基呈碱性。
方法1：
Simmons