文档介绍：大白菜抗根肿病基因CRb的分子标记验证与种质资源筛选
摘要：大白菜根肿病是一种严重影响大白菜生长的上传病害，已成为大白菜的重要病害 之一。CRb基因是抗大白菜根肿病的重要基因。本研究对已发表的6个CRb分子标记进行筛 选，获得1个与CRb紧密连锁的共显性标记TCR05»该标记在抗病纯和材料中产生279 bp的 PCR扩增片段，在感病材料中产生250 bp的PCR片段，在抗病杂合材料中同时产生279 bp 和250 bp的PCR片段。利用TCR05对24份育种材料进行筛选,均含CRb基因，其中8份为 纯合体，16份为杂合体，筛选结果与田间鉴定结果基本一致。
关键词：大白菜：根肿病;CRb：分子标记：种质资源
大白菜是原产于中国的重要蔬菜作物。大白菜根肿病是由芸整根肿菌侵染所致的一种上 传性病害［1］。根肿菌自大白菜根毛侵入细胞内，从根部皮层进入形成层，根部薄壁细胞受刺 激而加速分裂，导致根部长出肿瘤，植株萎孺死亡［2］。迄今，至少有8个大白菜抗根肿病基 因得到定位，分别是 Crrl、Crr2. Crr3. Crr4. CRa、CRb、CRc 和 CRk［3〜7］。其中，CRb 对 根肿菌生理小种2、4和8均具有良好抗性，并表现为单基因显性遗传特性［6］。本研究对已 发表的6个CRb标记进行验证，并对24份抗性种质资源进行分析，以期在大白菜抗根肿病 育种中对CRb基因的跟踪和提供抗性种质资源提供支持。
1材料与方法
供筛选与基因CRb紧密连锁标记的试材为抗根肿病大白菜自交系YH-036、感根肿病自交 系冠291以及两者的杂交组合。
供筛选种质资源共24个（表1）,其中BCYM-1〜BCYM-4和ZY-1-ZY-4为8个抗根肿病 大白菜自交系，其他16个为日本和韩国种子公司正在测试尚未推广的新品种。每个自交系和 品种选取最优良的单株进行测试。
1. 2试验方法
对引物及其序列见表2。
1. 2. 2DNA提取及PCR扩增利用改良CTAB法提取大白菜基因组DNA［8］。用于PCR反应的 试剂均购自生工生物工程（上海）股份有限公司。
PCR反应总体枳为20 uL：在96孔的PCR板中分别加入PCR Master Mix （2X） 10 u L,上游引物和下游引物（10 U）各1 uL, 50 ng/uL的模板DNA 2 uL, ddH20补齐至20 u Lo
PCR反应程序：94℃预变性5 min： 94c变性0. 5 min, 62℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 35个循环;72匕重延伸10 min, 4c保存。
PCR产物于1. 5*琼脂糖凝胶电压5 V/cm条件下电泳1 h,用Goodview染色，Bio-RAD凝 胶成像系统成像，观察并保留结果。
1. 2. 3分子标记筛选分别取YH-036、冠291和其杂交组合各16株用6对候选引物进行 PCR扩增和分析，筛选出最佳的分子标记。
1. 2. 4大白菜种质资源PCR鉴定利用筛选的分子标记对24份大白菜种质资源进行鉴定分 析。
2. 5大白菜种质资源抗病性调查大白菜种子催芽后播种于50孔穴盘，穴盘中所用基质 均经过高温灭菌，放置在光照培养箱中培养。每份大白菜