文档介绍：第四军医大学
博士学位论文
Connexin26、43对宫颈癌细胞的抑制作用及其信号转导机制的
研究
姓名:王红英
申请学位级别:博士
专业:妇产科学
指导教师:郑维国
20040501
导师签名:幽日期戳觥蠛赢嗡艨挣糍鬟旁橛蠢鞠日辩:△錾诶论文作者签各:三胛、诘际χ傅枷陆械难芯抗ぷ骷叭〉玫难芯砍晒>∥宜#宋中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,不包含本蛩艘焉昵胙换蚱渌猛臼褂霉某晒S蔑一同工作的同志对本研究所做的任何贡献蚜已在论文中作了嘲确的说嚼申请学位论文与资料若有不实之处,本八承摆一切相关责任。本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在校玫读学位期间论文工作的知识产权单位屠第四军医大学。本人保证毕业离较后,发表论文或接用论文鞒晒笔罡鞯ノ蝗匀晃5谒木酱笱АQ校可以公布论文的全部或部分内容缱影妫C苣谌莩,可以采用影印,缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被直阿和借秉承学校严谨的学风与优良的科学道嚣,本人声明所呈交的论文是震表示了致谢。阿,并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签,
缩略语表缩略语英文全称中文全称碱性磷酸酶过硫酸铵全反式维甲酸碱基对二氨基联苯胺二甲基亚砜澳化乙锭胞外信号调节激酶乙二胺四乙酸流式细胞仪,术异硫氰酸荧光素细胞间隙连接通讯辣根过氧化物酶干碱基千道尔顿嘌激光扫描共聚焦显微吸光度牛血清白蛋白间隙连接蛋白焦碳酸二乙酯钮’痗髂第四军医大学博士学位论文’
聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸缓冲液十二烷基硫酸钠/岬缬净撼逡四甲基异硫氰酸罗丹明丝裂原活化蛋白激酶噻唑蓝反转录聚合酶链反应第四军医大学博士学位论文/
,对宫颈癌细胞的抑制作用及其信号转导机制的研究中文摘要师:郑维国教授魅我绞第四军医大学西京医院妇产科,西安富颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,虽然对其发病机制已经进行了大量的临床和实验研究,但且前其病因学分子机制并不完全清楚。有研究证实,正常富颈组织中存在、的表达,而宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中间隙连接蛋白表达下降甚至缺失,宫颈癌细胞系中存在多种基因缺失,、的表达与宫颈癌的恶性程度呈负相关。富颈癌细胞中多种间隙连接蛋白的缺失,以及导致间隙连接通讯的中断可能是肿癯细胞逃避细胞分化监控的机制之一。细胞间隙连接是普遍存在于动物组织中的一种细胞连接形式,是由间隙连接蛋白所形成的六聚体跨膜蛋白通道结构,。细胞阊隙连接通讯调控细胞的新陈代谢、增殖和分化等生理过程,对机体的代谢平衡及生长发育有重要意义。其功能异常与多种肿瘤的发生、发展及转移密切相关。大多数肿瘤细胞与非肿瘤细胞相比,间隙连接通道减少,间隙博士研究生:王红英导第四军医大学博士学位论文
连接蛋白表达下降。族,其抑制肿瘤细胞生长的作用机理是复杂的,有研究表明,它可能既是的调节剂,又可以不依赖于的研究目的:本实验通过研究富颈癌细胞基因组中间隙连接基因的子的变化,分析其信号转导调控机制,为深入阐明子宫颈癌病因学分子机制及探讨可能的基因治疗途径提供可靠的没蛑刈榧际酰竦胏珻蛉ǔて危并构建其真核表达载体,通过脂质体方法将基因转τ妹庖咦橹Х椒ā⒓す馍韫簿劢瓜晕⒕捣治黾白的表达情况,经椒ê拖赴芷诩觳夤鄄靋τ猛庠葱晕姿嵋允奔浼亮恳览捣绞酱碳は赴9鄄肿瘤分化诱导剂维甲酸对细胞的作用情况,利用细胞划痕标记荧光传输技术,观察细胞间隙连接通讯恢复情况,激光扫描共聚焦显微镜,定位和定量分析转染细胞近年的研究认为,间隙连接基因家族是一抑癌基因家方式而调控细胞生长。表达及对细胞间通讯功能的直接影响,检测细胞内信号分实验依据。研究方法;τ肦狿方法、和流式细胞仪,分析正常子宫颈组织及宫颈癌细胞中、的表达情染至宫颈癌细胞系中,应用—觳庀赴诨因变化。术、流式细胞技术,定性、定量分析转染细胞中两种蛋因转染对细胞的生长增殖的影响。况。第四军医大学博士学位论文
种第二天起,出现增殖明显减慢。划痕标记荧光传输试验,结合荧光显微胞质内第二信使一游离盷,浓度变化。分析,检测转染细胞内蛋白酪氨酸磷酸化状态,以研究结果:,基因、蛋白表达阳性,而富颈癌细胞中表达阴性。痪卑┫赴礖鼵珻蜃H竞螅琑狿方法检测发现细胞内,基因阳性。妹庖呋Хḿ觳夥⑾郑H鞠赴贑的表达阳性,在细胞膜及细胞浆处两种蛋白均存在表す馍韫簿劢瓜晕⒕捣治黾际酰⑾至街值鞍自诰部分细胞内呈共表达状态,表达位于细胞膜和细胞质发现两种蛋白的表达分别为.%、.%。赴芷诩觳夥⑾肿H鞠赴鸊谙赴壤飨韵陆担期细胞比例上升,细胞增殖受阻。庠葱晕姿嵋允奔浼亮恳览捣绞酱碳は赴⑾肿H细胞生长速度明显减慢,并存在时间剂量依赖性。随时染细胞间荧光传输增加,维甲酸刺激能加强细胞间这种传输能力。及活性表达情况,分