文档介绍：:国家自然科学基金项目月日广州、专名学位申请指导教称内科学挡人黄茂梁师张振书教授答辩委员会主席答辩委员会成员胡品津教授李瑜元教授陈其奎教授聂玉强教授智发朝教授论文评阅人詹俊教授杨见权教授赵亚刚教授业南方医科大学级博士学位论文‘。一飘璺曝☆箱竉鼻∥塾燕嚣昴—※‘’
.甅轴对肝星状细胞胶原合成的影响及其信号转导机制研究博士研究生:黄茂梁指导教师:张振书教授辅导教师:李旭副教授摘要研究背景肝纤维化是各种原因引起的慢性肝损伤结果,是肝硬化形成的病理基础。探讨肝纤维化的发生机制及防治方法具有重要的社会价值和经济意义。尽管现已认为肝纤维化在~定情况下可被逆转,但目前尚未有公认有效的逆转肝纤维化药物,因此肝纤维化治疗一直是慢性肝病研究的重点和难点。本课题组前期研究及近年来国内外研究表明,,与肝纤维化形成密切相关。慢性肝损伤导致肝内母髯榉稚系鳎徊娇傻贾卵跤ぁ⒀字⑾赴奂透蜗宋纬伞Q管紧张素钦飧鱿低车闹饕PвΤ稍保艽碳じ涡状细胞琀鲋秤牖罨⒛苁头叛字⒁蜃印⑸ひ蜃以及促纤维化因子等,诱导铣上赴饣,及抑制到猓贾翬在肝内过度沉积,促使肝纤维化发生发展。近年来越来越多的证据表明,应用淖瓒霞量梢约跚岣嗡鹕恕⒁种聘蜗宋纬珊徒低门静脉高压。近年来,...岬姆⑾郑鹆诵矶嘌芯空叩呐ê裥巳ぁQ管紧张素转换酶,到釧并同时产生—。—在体内外能拮抗的活性,具有舒张血管、降低血压、博士学位论文.,
方法利尿、抑制成纤维细胞增殖等作用。此外,箍梢跃赫缘赜階的受体结合,因此被认为是一种内源性阻断剂。由于...峋哂杏刖銻..轴喾吹淖饔茫蚨患偕栉具有抗纤维化作用,有可能成为肝纤维化治疗的新策略。然而...嵩诟蜗宋械难芯可儆斜ǖ馈D壳暗难芯勘ǜ发现,慢性肝损伤反应促发一—.嵩诟文诒泶镌銮浚瓒险条轴的作用则会导致肝损害加重。然而,.甅轴影响肝纤维化的诸多环节尚未得到充分阐述,具体机制尚不清楚。肝纤维化的特点是暮成分泌增加和降解减少,导致罅砍粱孪宋岬拮橹錾=涸荅的主要成分。遣鶨的主要细胞,罨⒃鲋场⒆P秃头置诮涸在肝纤维化的发生发展中起关键作用。近来对纤维化信号机制的研究表明,和疪藕磐肥切路⑾钟隦作用相关的两个重要途径,与胶原合成密切相关。因此,..。嵩诟蜗宋中的作用及其机制有重要意义。⒗盟穆然斐筛沃卸舅鹕耍菇ǜ蜗宋笫竽P停ü染色法观察肝脏组织病理的改变,免疫组化方法观察在肝组织中的表达及分布,.ḿ觳釧蚆受体的表达水平,法检测蛋白表达水平;以L逋馐笛榇碳ざ韵螅ü齊甈法和法,检测不同浓度干预时和芴宓谋泶锼健与稍,及利用信号通路抑制剂阻断方法,通过法检磷酸化表达水平,免疫荧光法观察俗N唬用地高辛标记的凝胶阻滞实验检瓺结合活性;通过蛋白表达水平,法检测水平。中文摘要⒂τ肁
结果⒂τ寐《驹靥褰榈嫉腞干扰技术,构建含针对基因的扰序列的慢病毒敲除载体,并感染赴辏瑀ê蚖法检测干扰效率;通过、、基因定量等方法,检澳和干预及基因沉默前后和表达的变化,同时利用信号通路抑制剂阻断方法,。蜗宋笫蟾文贏蚆表达增高在给予大鼠皮下注射芎螅琀旧ḿ涡∫督峁蛊苹担蜗宋峤形成:免疫组化表明,肝脏表达水平明显增加,而且广泛分布;.结果显示,与对照组相比,⑸周后大鼠肝内水平轻度增加,但累积到苁保珹较灾黾尸.。结果显示,蛋白表达水平变化与表达水平相一致。虮泶锼接階谋泶锉浠酒叫小4送猓τ一种种萍纱偈垢嗡鹕舜笫驛水平上调,提前出现增高,且增高水平较单独处理组显著.。处理后蠥蚆表达增高干预处理的表达水平增加,且与不同浓度干预的呈剂量依赖性效应关系。,均。分析进一步证实不同浓度蠥鞍姿匠始亮恳览敌缘卦龈摺4送釧ご碜榭墒笰泶及水平较处理组进一步增加。.抑制激活蠸藕磐在后,,博士学位论文后,及疞和处理后,干预,
蛋白水平达到高峰,,尸.。单独干预攵哉兆橄啾任尴灾浠均。瓒霞..预处理梢值踠诱导的姿峄均、核转位以及岷匣钚栽黾均,芴遄瓒霞罙明显逆转訟诱导姿峄蚐岷匣钚栽黾均,提示通过途径迅速激活通路,蛲ü齅受体发挥拮抗作用。的抑制剂ご硪嗫上灾诱导姿峄鳳/或称的抑制剂ご碜樵蚍L崾続快速激活通路依赖于的活化。.抑制激活蠷/路干预处理后,..抑制诱导与泶锏淖用。实验提示通过途径激活疪罚珹则通过芴遛卓勾俗饔谩.—抑制