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ELISA
灰区的设置及质控方法
ELISA测定的阳性判断值，通常是将大量阴性和阳性人群的测定数据进行统计分析后确定
的，其确定依据为判断结果的假阳性和假阴性率最低。
在阳性判断值周围一定范围内之外的
测定结果可归为可疑，亦即
ELISA
测定的“灰区”。“灰区”的大小可用统计学方法确定。测定
结果处于“灰区”的样本，可通过确认试验或追踪检测来确定到底是阳性还是阴性。
”。“灰区”
的大小可用统计学方法确定
??
具体是怎么确定的，。
或者大概粗略的方法计算是怎么样的呢？？高手在哪呢
ELISA“灰区”是把定量分析的正常
值范围引入定性分析而建立的概念。
灰区的设置有二种：
（1）×（1±C），C为该试剂的批内C(一般在
15-20%间）；
（2）±2S，S为实验室做室内质控
ROC的S。
另外，个人认为：ELISA“灰区”对于不同项目和应用的领域不同
,其设置不能一概而论。根据
美国疾病控制中心（
CDC）对美国Ortho的抗HC检测的ELISA试剂盒进行研究，发现只
有检验结果S/CO≥，高度预示
HC抗体真阳性状态；若检验结果
S/CO<，存在较
高的假阳性。在血站系统的献血员抗
HC筛查用上述两种灰区的设置方法没有什么不可；
如果临床实验室抗
HC的灰区也按前者设置，
势必存在较多的假阳性，
如何设置灰区应该是
值得研究和商榷的。
这位老师好，不好意思，
本人愚昧，还不是很清楚这两种方法在实际的
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应用，可否举一个小例子。比如HBsAg>
是阳性，如果测量得吸光度是

断，结果是阴性，但是是有很明显颜色的。在血站系统这样的血就不敢用，怎么解决呢，我
们经常遇到测量阴性但是有颜色的标本，用不同厂家的试剂或是同种试剂重复实验还是一
样，又担心存在弱抗体的问题。
怎么解决呢，万分感激国内试剂测
HBSAG
的cutoff
值一般不会达到
，除非不做空白。
其cutoff的公式一般为NC*。我只是举例。别找问题以外的事情来说呀，我等答案等得着急第三章ELISA技术的质量控制
概述
Engall和Perlmann于1971
年首先建立了酶联免疫吸附试验（enzymelinked
immunosorbentassay,ELISA
）。随着科技的发展，ELISA在抗原、抗体、酶、固相载体及
包被技术等方面都有较大的进步，
其灵敏度和特异性均大大提高。
由于该技术具有简便、
快
速、经济等特点，因而已被广泛应用于各行业。尽管如此，
ELISA
在应用过程中仍然存在
着许多难点，必须严格控制才能保证检测的质量。
ELISA质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。现分述如下：
一、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、
IgM抗体捕捉法、
竞争抑制法，其中竞争抑制法因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响，
结果重复性
较差，质量较难控制。
二、试剂因素
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免疫检测的原理均基于抗原抗体反应。
由于该反应过程受多种因素的影响，
如普遍存在基质
效应、交叉反应等，因而检测结果难以溯源，不同方法、不同试剂之间甚至同一试剂不同批
号间结果均缺乏可比性。试剂质量在很大程度上决定了检测的水平，
因此在引入新项目之前
必须对试剂进行严格的评估。
试剂的评估有以下几个步骤：
⑴确定开展该项目的必要性；
⑵
了解该项目现有的检测方法和原理；⑶在了解试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较，
判断标准首选参考方法或参考物质，
其次为临床的满意度及权威机构的报告如各级室间质量
评价、CDC报告等；⑷定期对检测结果进行追踪反馈直至最终认可该试剂。

不同批次的 ELISA 试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，即使是通过批批检的项目其
检测结果也存在差异，
因此必须选择和订购长批号的试剂，
并保证保存条件。