文档介绍:基因工程载体植物基因工程
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本章重点掌握的内容
掌握载体、克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、α-互补、插入失活、人工染色体载体的概念。
克隆载体DNA分子具备的条件。
标记基因的分类及其作用。
质粒克隆载体用途。
λ-DNA载体的构建、类型及其优点。
植物表达载体的组成、启动子的类型等
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遗传物质 + 载体
重组的DNA分子
引入细胞或生物体内
复制与表达
稳定地遗传给下代
为什么要用到载体?
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基因工程流程图
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为什么需要载体?
1)独立的一个包括启动子(promoter)、编码区(encoding region)和终止子(terminator)的基因,or 组成基因的某个元件,一般是不可以进入受体细胞的;
2)采用理化方法进入细胞后,也不容易在受体细胞内维持。
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载体的概念
载体(vector)
基因工程中,携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具称为载体。
目的基因能否有效转入受体细胞,并在其中维持高效表达,在很大程度上决定于载体 。
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载体的功能
载体的功能
运送外源基因高效转入受体细胞
为外源基因的扩增或表达提供必要的条件
为外源基因提供整合能力
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载体的要求
A、复制起点:能在受体中复制;
B、选择标记和筛选标记;
C、限制性内切酶切割位点(多克隆位点);
D、载体的大小:原则上要求载体越小越好;
E、适当的拷贝数;
F、载体的安全性:质粒不能随便转移;
G、外源基因的表达:启动子。
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大肠杆菌质粒载体
pBR322结构图
复制起点
选择标记基因
克隆位点
克隆位点
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载体的分类
按功能分类
克隆载体 克隆一个基因或DN***断
表达载体 用于一个基因的蛋白表达
整合载体 把一个基因插入到染色体组中
按来源分类
质粒载体
噬菌体载体
柯斯质粒载体
人工染色体载体
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