文档介绍：尿路致病性大肠杆菌外膜蛋白闹虏』硌芯月日课题来源:国家自然科学基金项目学位申请养在人曹虹教授病原生物学学术型硕士研究生公共卫生与热带医学学院答辩委员会主席彭涛研究员答辩委员会委员江振友教授芮勇宇教授吴英松广州导师姓专培类层所学屈娅荣称次赵卫南方医科大学业型院端妒垦宦畚名
蜘/痜尿路致病性大肠杆菌外膜蛋白的致病机理研究尿路感染蝍硕士研究生:屈娅荣指导教师:曹虹教授摘要一、研究背景和目的琔虺颇蚋校侵覆≡迩秩肽蚵氛路感染,前者主要为膀胱炎,后者为肾盂肾炎,肾盂肾炎又可分为急性和慢性。础疾病,尿路感染还可分为复杂性尿感和非复杂性尿感。可以发生在任何年龄,男性的发病率约为%,而在岁以后,由于前列腺疾病和泌尿外科手易感,据统计,大约有%的发生在女性,年龄在到岁之间,其中%女性在初次尿路感染后半年内复发,约有%的女性一年内受到复发素为主,由于致病菌临床的耐药性越来越强,使其容易反复发作。反复发作的大部分尿路致病菌都起源于肠道,经尿道上行至膀胱。约%的的起硕士学位论文膜或组织引起的尿路炎症。根据感染部位,尿路感染可分为下尿路感染和上尿根据标准【,急性肾盂肾炎是细菌入侵肾脏,引起急性间质肾小管炎;而慢性肾盂肾炎,又有静脉肾盂造影典型肾盂肾炎的影像学表现。根据有无基术,其发病迅速增加到%~%【。由于女性的特殊生理构造,女性比男性更的困扰。尿路感染是临床最为常见的细菌感染之一,目前治疗主要以使用抗生尿路感染不仅使病人遭受痛苦也在全球造成很大的医疗和经济负担。始感染部位是膀胱,在尿路感染中,由尿路致病性大肠杆菌//,璉起的占ァD壳爸饕5难芯抗ぷ魇俏展开的。
流行病学分析表明,多数中的与切,懈、、、琌是一种在变性溶液中都具有很强活性的蛋白水解酶,因其引起外源表达蛋白的严重降解而引起关注。作为一种多活性蛋白酶,它是引起外源充足蛋白降解的重要的蛋白水解酶之一,在尿路感染中有重要的作用。其底物及切割位点的不同均可引起其作用活性的改变,主要识别水解由碱性氨基酸蚅残基组成的肽键。研究发现与鼠耶尔森杆菌本课题中,我们利用本实验室前期构建的尿路致病性大肠杆菌的基因敲除株和回补株幸幌盗惺笛檠芯俊N颐嵌詏考察。通过建立人膀胱癌移行上皮细胞细胞模型,并提取细胞外基质,考察与细胞外基质相互作用的情况。结果发现与野生株相比敲除株等基因密切相关,研究表明与这些毒力基因在遗传学上并非紧密连接,的、孤立的,而是彼此联系,相互制约的,构成了复杂的基因表达调控网络。几乎完全不可能确切的反应生命现象本身和内在规律。所以我们在本研究中通过荧光定量椒ǚ治鰋蛴胂妇饕pじ蕉玖騣和毒力基因同时我们通过建立小鼠急性尿路感染的动物模型,比较野生株与绝大多数都携带基因,其编码的外膜蛋白%同源的性【俊S醒芯恐っ鱌可以增强细菌黏附到细胞外基质并可以激活纤溶酶原转换为纤溶酶,促进细胞外基质的降解而致病的功能。是否也具有与细胞外基质相互作用影响尿路致病性大肠杆菌的黏附侵袭而致病呢生株和敲除株对体外细胞模型和对细胞外基质的黏附情况进行的黏附率明显降低,推测可能会增强致病菌对细胞外基质的黏附能力,为后续的降解细胞外基质,促进细菌进入胞内打下基础。推测其功能与这些毒力基因的相互调控相关S捎诨虻谋泶锏骺夭皇堑ヒ几乎所有的细胞活动和功能都受基因网络调控,独立的研究单个基因及其表达的关系,明确是否在调控毒力基因的表达中起到一定的作用。基因缺失株所致尿路感染小鼠的泌尿器官的病理改变的差异,比较产生菌血症的差异和膀胱和肾脏组织中的细菌组织载量的不同,考察在中文摘要
二、研究方法致炎过程中的作用。其次,我们采用酶联免疫吸附试验珽兔庖咦橹У姆椒ū冉先笔蚝螅课题的目的在于初步研究在尿路致病性大肠杆菌的致病中所起到的作用。甇胂赴饣氏嗷プ饔枚韵妇じ角窒挠跋通过将细胞外基质和细胞共同作用以后,检测有无细胞外基质,细菌对细胞的黏附侵袭率的变化,探讨与细胞外基质的相互作用以及对细菌的黏附侵袭的影响。采用去细胞化方法进行体外细胞外基质的提取,在去细胞化的培养皿上接种人膀胱癌上皮细胞细胞,检测细菌对其的黏附侵袭,同时在没有预铺板的平皿做常规细菌黏附侵袭实验,比较对细胞外基质的黏附的基底膜基质胶按照说明书用预冷的罰中稀释倍,吸取∈、。后用%的轻柔冲洗魏螅晕⒕迪轮苯庸甇员嗦胂妇じ剿兀痟蚣氨嗦胱L鞍譱虮泶锏挠跋通过荧光定量椒ḿ觳釵员嗦腽じ剿豬和转铁蛋白基因用两步法进行反应,将总孀B嘉猚D诓位值换算得出基因的相对表达量,进行比较。。本情况。利用公司的细胞基质胶进行细菌的黏附实验。将购买的商品化小鼠来源×痬譒于腔室玻片中室温孵育。对照组加入察结果。的表达的影响。采用法提取、、淖躌,采因,以为模版进行染料法,进行荧光定量从Γ硕