文档介绍：青岛大学
硕士学位论文
尿路致病性大肠杆菌溶血素A基因的克隆和序列分析
姓名:亓春玲
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:张文卿
20090606
中文摘要尿路致病性大肠杆菌溶血素虻目寺∮胄蛄蟹治硕士研究生指导教师张文卿教授关键词:尿路致病性大肠杆菌;基因;换蛐蛄亓春玲≡镅目的分离尿路致病性大肠杆菌,俅擦行株,构建溶血素琱基因重组质粒并进行序列分析。了解其基因变异情况。方法自临床尿路感染标本中分离溶血性大肠杆菌株。按械膆基因保守序列设计合成引物。以获得的基因组D0澹肞方法扩增其基因片段。将目的基因克隆至靥澹;蟪Ω司鶧筛选并鉴定阳性克隆。对获得的阳性克隆测序并进行同源性分析。结果扩增的目的基因大小V刈橹柿>盖屑癙鉴定表明获得正确重组子。重组菌株在血培养基上可产生苎;贰2庑蚪峁允荆琹龇掷胫蛄型葱愿哂%。其与械膆蛐蛄械耐葱晕ヒ上。个序列中共发生处碱基的替代,但均属于同义突变,没有碱基的插入与缺失。结论基因高度保守。本研究在国内首次成功地克隆了基因。为进一步研究的结构、阐明的致病机理、探讨作为特异性诊断靶点及保护性疫苗的研究奠定了基础。
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符号说明
弓既叉听畚殓日期:加贳淘率疐听吞硅日期:加晖璻日日期:油晔耭日学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人己用于其他学位申请的论文或成果。本人如违反上述声明,愿意承担由此引发的一切责任和后果。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品,知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为青岛大学。本学位论文属于:保密口,在年解密后适用于本声明。旧鞯陌嫒ü榍嗟喝校淳砜桑魏蔚ノ患叭魏胃鋈瞬坏蒙米允褂论文作者签名:不保密囱。朐谝陨戏娇蚰诖颉啊导师签名:
己泌尿道感染琔谴蟪Ω司Φ劳飧腥咀畛<男问街唬也是临床上的常见病和多发病,居临床感染性疾病的第二位【俊D蚵分虏⌒源蟪Ω司,侨松鲇凵鲅缀推渌谀蛳蹈腥境<牟≡菌,该菌常于患者机体免疫力下降时侵入泌尿系统引起尿路感染,也有患者是在接受泌尿系统器械检查等侵袭性操作而擦伤后,导致医院获得性感染【。感染可以限于下尿道引起膀胱炎、尿道炎,也可上行累及肾盂肾盏,引起肾盂肾炎。近年来,随着免疫抑制剂和大量广谱抗菌药物的应用,多重耐药菌株感染病例有增加的趋势。如果用药不规范,细菌极易产生耐药性,致使顽固的存在于膀胱组织中,从而成为复发性尿路感染的难治根源,损伤肾功能,导致肾功能不全。导致的临床症状重,可累及全身,反复发作,严重者可引起溶血性尿毒综合征,,对患者肾脏造成不可恢复性损伤和死亡,病死率高【,给病人和社会造成极大的负担。体外实验表明,产生溶血素的菌株破坏远曲肾小管,易侵入细胞内。在小鼠上行性泌尿系感染动物模型中,溶血素产生菌株导致的肾盂肾炎菌血症死亡率高于非溶血素产生菌株,苎K赜肫渌闹虏∫蜃印穑纬芍虏」亓5,,可以引发尿毒症【,家族中的一员,其操纵元诖蟪Ω司旧迳嫌个基因组成,即、、,和】。其中,基因产生相对分子质量为的毒素蛋白,但必须经过为膆鞍柞;蟛拍苄纬捎毒性的成熟蛋白。的分泌既不需要细胞的裂解,也不需要信号肽的切除。在能量物质的参与下,由、及外膜蛋白共同作用,将成熟的分泌到胞外;然后,在的帮助下,溶血素分子插入到宿主细胞膜中,产生了一个直径约的允许大分子阳离子物质通过的通道,由此造成、、甘露醇和糖类物质从这个孔道中渗出国外对感染过程给予极大的关注,并从多角度、多层次地研究毒力、致病机理及其防治措施等。据美国统计%.%的急性膀胱炎病人和%.
病人由致。肾盂肾炎大肠杆菌引起。迄今己发现具有多种毒力因子,大部分由细菌基因组中致病岛上独立基因编码【】。这些毒力因子按照其在细菌表面的表达情况,可分为表面毒力因子和分泌毒力因子两大类。苎K厥荱掷胫曜钪匾5姆置诙力因子,为溶细胞毒素,属于革兰阴性杆菌病原体毒素家族中的同类物。溶血素的致病性很重要,其靶点细胞分布十分广泛,包括红细胞、白细胞、内皮细胞及肾脏的表皮细胞¨。苎K乜梢砸⑷死嗳苎P阅蚨咀酆现出现溶血性贫血,血小板减少性紫癜和急性肾衰竭,颊咚劳雎饰%.%。因此,分离株溶血素琱基因的研究具有重要的理论意义和应用价值。基因位于染色体上,长约【9庖驯ǖ懒薝瓯嗦雋全基因序列,并分析了部分菌株的基因变异情况。而国内目前尚未见到基因变异研究的相关报道。基因的变异将导致其对宿主的致病性、抗