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细胞计数方法细胞计数板法.doc

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细胞计数方法细胞计数板法.doc

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细胞计数方法------细胞计数板法
实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作:
1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。
2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:
细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml
(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m×16即每个格的平均值。所以,细胞密度=m×16×10个/ml)
说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为:
(长)×(宽)×(高)= 而 1ml=1000ul=1000mm
(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。)
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细胞计数板的使用
一、血球计数板-基本构造
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血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,,,每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
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二、细胞计数板-使用方法
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
4.静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移

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