文档介绍：血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
普通高中课程标准实验教科书-—生物选修1[人教版]
课题３ 血红蛋白的提取和分离
★课题目标
（一)知识与技能
１、尝试从血液中提取和分离血红蛋白
2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理
   （二)过程与方法
体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤
（三)情感、态度与价值观
初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神
★课题重点
凝胶色谱法的原理和方法
★课题难点
样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填
★教学方法
启发式教学
★教学工具
多媒体课件
★教学过程
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
（一）引入新课
蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？
(二)进行新课
１．基础知识
蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别,由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法)：
（1）原理:(图5—13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短,流动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,路程长，流动慢.
（2）凝胶材料：多孔性,多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：（图５－13ｂ）
混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子
*洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
（1)原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如H2ＣO3－ＮａHCＯ3,HＣ—NａC，ＮaＨ2PO4/Na2ＨPＯ４等),调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pＨ稳定。
1。3凝胶电泳法:
(1）原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
[思考]阅读教材后，填写下表：
决定运动方向
形成库仑力
形成阻力
决定运动速率
电荷性质
√
电荷量
√
√
分子形状
√
√
分子大小
√
√
(２）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰***经胶电泳等.
（3)分离过程:在一定ｐH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的ＳDS，形成“蛋白质－SＤＳ复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小.
２．实验设计
2。1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定.
思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的?为什么?
不是。因为蛋白质的来源和性质不同,分离方法差别很大.
（1)你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白?为什么？
哺乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核,血红蛋白含量高。
（2）请阅读教材,认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下列问题:
血液由 和 两部分组成.
血细胞中 细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是 。
该化合物是由 和 构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O２和ＣO2结合的 基团。
2。3从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。洗涤红细胞的目的是什么?
除去血浆蛋白的杂蛋白,有利于后续步骤的分离纯化。
红细胞的洗涤过程为
血液+柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞+5倍体积生理盐水 →缓慢搅拌1０ｍin→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色
思考:加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心?为什么要缓慢搅拌？
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
血红蛋白提取和分离
防止血液凝固；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。
思考：你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来？
加入蒸馏水,用玻璃棒快速搅拌一段时间。
补充：，有利于血红蛋白的释放和分离。此时，红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯有机溶剂等