文档介绍：实验二细菌的革兰氏染色及芽孢染色法一、实验目的: ? 1. 学****并掌握革兰氏染色法和芽孢染色法。? 2. 巩固显微镜油镜的使用技术。? 3. 巩固无菌操作技术二、实验原理: ? : ?革兰氏染色法是 1884 年由丹麦病理学 所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌( G+ )和革兰氏阴性菌( G—)两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。二、实验原理: ?主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。? G+ 菌细胞壁:肽聚糖含量高( 90 %)、交联程度高、肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色; ? G- 菌细胞壁:肽聚糖含量低( 10 %)、交联程度低,肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。 : 二、实验原理: ?芽孢是某些 G+ 菌形成的圆形或椭圆形的休眠体,抗热性和折光性较强。?芽孢的大小、形态、位置可做分类依据。二、实验原理: 中央芽孢末端芽孢偏端芽孢游离芽孢二、实验原理: 芽孢壁厚、透性低,着色和脱色均较困难; 但当用弱碱性染料(孔雀绿)在加热的情况下进行染色时,染料可进入菌体和芽孢; 进入菌体的染料经水洗后可被脱色; 当用对比度大、浅色的复染色剂(番红)染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色(绿色),而菌体呈复染剂颜色(红色)。三、实验器材? : ?革兰氏染色:培养 12h-16 h 枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis )或者金黄色葡萄球菌( ocus aureus )和培养 24 h大肠杆菌( Escherichia coli ) ?芽孢染色:培养 36 h 的巨大芽孢杆菌( Bacillus megaterium )或者枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis ) ? 2. 染色液和试剂: ?革兰氏染色染色液:结晶紫、卢戈氏碘液、 95% 酒精、番红复染液; ?芽孢染色液: 5% 孔雀绿水溶液、 % 番红水溶液; ?二甲苯、香柏油。? 3. 器材: ?载玻片、接种环、试管夹、酒精灯、擦镜纸、显微镜。三、实验器材四、实验步骤? : ?(1)涂片:涂片方法与简单染色涂片相同。?(2)干燥:与简单染色法相同。?(3)固定,与简单染色法相同。?(4)初染:加适量结晶紫染色液染色 1- 2min ,水洗。?(5)媒染:滴加卢戈氏碘液,媒染 1min ,水洗。