文档介绍：中国医科大学
硕士学位论文
白血病免疫分型细胞芯片捕获细胞的免疫细胞化学研究
姓名:胥威
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:赵雨杰
20080401
·英文缩略语·
墨叁日期:童碰;善。出中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。论文作者签名:本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C内容除外圆捎糜坝⑺跤』蚱渌侄伪4媛畚摹指导教师签名:表示谢意。日
白血病免疫分型细胞芯片捕获细胞的免疫细胞化学研究的目·中文论著摘要·生物芯片诞生于上世纪年代初,是近年来高新技术领域中极具时代特征的重大进展,是物理学、微电子学与分子生物学综合交叉形成的高新技术。被广泛应用于疾病诊断等多方面。目前,白血病的免疫分型诊断主要依靠用已知的单克隆抗体去鉴定白血病细胞表面或胞浆抗原一抗原,根据不同抗原在不同阶段的出现与消失,决定白细胞所属的系列及分化阶段,做出免疫学诊断。本实验室构建的白血病免疫学分型细胞芯片就是利用抗原、抗体特异性结合的原理,将白细胞表面分化抗原单克隆抗体固定于载体上,形成抗体点阵。不同的单克隆抗体能够自动识别和捕获表达相应表面分化抗原的细胞,从而对白血病进行免疫学分型。这种对白血病进行免疫学分型的方法较免疫细胞化学和流式细胞仪检测法具有高通量、使用简便、样品用量少、检测速度快、灵敏度高、经济实用等优点。但是,白血病免疫分型细胞芯片作为一种新型的方法,需要传统公认的免疫细胞化学技术和流式细胞术的验证。另外,白血病免疫分型的检测,需要细胞表面抗原和胞浆抗原的检测,尤其是在双表型检测及特殊表型的检测时,胞内抗原的检测更是十分重要的。澳大利亚悉尼大学医学研究所的人兄的白血病免疫分型抗体微阵列,仅能检测细胞表面分化抗原,而我们实验室所研制的芯片以具有透明性的玻璃为载体,在表达相应抗原的白细胞与芯片上的抗体结合后,在其上用免疫细胞化学,来检测胞浆内的分化抗原,将结果直观、稳定的表现出来,为临床诊断提供更快速、简便、完善、准确的白血病免疫分型诊断方法。
方法⑷范ㄐ酒喜痘裣赴淖罴压潭ǚ椒⑷范ㄏ赴酒系拿庖呦赴玫タ寺】固宓淖罴雅ǘ⒂妹庖呦赴Хㄈ旧赴酒痘裣赴陌ぜ鞍乖⒓觳庀赴酒痘裣赴奶匾煨⒂τ孟赴酒邪籽2∶庖叻中筒⒂妹庖呦赴Хㄑ橹ぬ异性制备细胞芯片,室温条件下,分别用下列固定剂固定状迹罕/秒;ヒ掖分钟;ヒ掖迹罕姿液./分钟;%乙醇:甲醛:。除液固定后用蒸馏水洗橥猓溆喙潭ḿ凉潭ê笮酒匀环绺伞C庖呦赴Ш笙晕镜下观察点阵捕获的细胞形态、抗原的表现情况、细胞核复染着色情况及计数固在相同条件下,细胞芯片上细胞用最佳固定方法固定,进行酶标免疫细胞化学,第一抗体抗⒖笴⒖笴⒖筂浓度分别为痬跣远哉盏渭拥攘縋,室温下孵育∈保籇显色,显微镜下观察结果。细胞芯片,用最佳方法固定,按痬罴雅ǘ认∈兔庖呦赴У谝豢体羊抗人抗⒖笴⒖笴⒖筂,阴性对照用撼逡捍娴一抗体,免疫细胞化学染色后,显微镜下观察结果。体抗⒖笴⒖笴跣远哉沼肞缓冲液代替第一抗体,进行免疫细胞化学操作后,显微镜下每种抗体点上取三个高倍镜视野,计数细胞总数和有棕色颗粒的阳性细胞数,计算阳性率。制备应用于白血病免疫分型的细胞芯片,从白血病患者的外周血中提取白细胞,橙染色,孵育芯片,逑矗瑁觳庑藕牛玫桨籽2∶庖叻中定前后细胞数量。痬痬痬.
馇结论关键词术结果。再用免疫细胞化学验证。⑾赴酒痘裣赴墓潭ǚ椒ㄒ訟%乙醇:甲醛:水::⑾赴酒系拿庖呦赴玫タ寺】固宓呐ǘ纫痬椅孪路跤⑾赴酒厦庖呦赴У谝豢固逦?笴、抗、抗时,棕色颗粒在细胞膜上;第一抗体为抗弊厣ǹ帕T诎小⑾赴酒奶匾煨圆痘裱粜月试±%以上,非特异性捕获阳性率在籽2∠赴酒奶匾煨圆痘裱粜月试±%以上,具有明显的特异籽2∶庖叻中托酒痘裣赴墓潭ㄓ肁%乙醇:甲醛:水::./室温下固定种幼罴选⒚庖呦赴У谝豢固逡痬椅孪路跤小时为最佳。⑿酒痘裣赴妹庖呦赴Хńòた乖旧ǔ隼础⒂妹庖呦赴Хㄑ橹は赴酒痘裣赴哂懈叨忍匾煨浴⒂冒籽2∶庖叻中拖赴酒籽2』颊咄庵苎=忻庖哐Х中停同时进