文档介绍：HIV- 1 P24 抗原检测方法研究进展关键词: HIV-1 P24 抗原;酶免疫测定法;检测方法今年是世界艾滋病流行以来的第33个年头,全球艾滋病流行与防治形势都发生了巨大的变化。自上世纪九十年代中期高效联合抗逆转录病毒治疗( highly active antiretroviral therapy,HAART )技术应用以来,成千上万的艾滋病病人得到有效治疗。然而,由于 HIV 本身的高变异率,导致临床上尚无有效的根除 HIV 的治疗方法。因此,对艾滋病的防控手段仍以预防为主。目前,对HIV 感染的检测方法包括抗体检测、 P24 抗原检测、核酸检测以及 CD4 +T淋巴细胞水平检测等。由于从感染 HIV 到出现可检测的抗体尚有一段时间,因此虽然抗-HIV 检测的 ELIS A 试剂经历了 4代发展[1],但其“窗口期”问题仍不可避免;而可以进一步缩短“窗口期”问题的核酸检测和 CD4 +T淋巴细胞水平检测,由于其检测过程较复杂、耗时较长且需要特殊仪器而不易普及。 HIV-1 侵入人体后,核心抗原 P24 的水平随着病毒 RNA 水平的发展而发展, 并在急性感染期即可出现,通常被认为是病毒复制的间接标志,与病情发展密切相关。因此,血液及其他体液标本中 P24 抗原的检测可以缩短窗口期,有助于 HIV-1 的早期诊断、预后判断及评价抗病毒治疗的效果,具有良好的实际应用价值。 1 P24 抗原的生物学特性 HIV 属于逆转录病毒科慢病毒属中的人类慢病毒组,为直径约 100-120 nm的球形颗粒,由核心和包膜两部分组成。核心包括两条单股 RNA 链、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类,包括逆转录酶(RT,P51/P66 ),整合酶(INT,P32 ) 和蛋白酶( PI,P10 ).核心外面为病毒衣壳蛋白( P24 ,P17 ).病毒的最外层为包膜,其中嵌有 gp120( 外膜糖蛋白)和gp41( 跨膜糖蛋白)两种糖蛋白。HIV 基因全长约 ,含有 3个结构基因(gag,pol 和env )、2个调节基因(tat 反式激活因子、rev 毒粒蛋白表达调节因子)和4个辅助基因(nef 负调控因子、vpr 病毒 r蛋白、vpu 病毒 u蛋白和 vif 毒粒感染性因子)。 HIV 变异性很强,各基因的变异程度各不同。其中以 env 基因的变异率最高,gag 和pol 基因相对保守。 Gag 基因编码 55kd 的前体蛋白,在pol 基因编码的蛋白酶的加工下产生 P17 、P24 和P55 蛋白,因此 P24 蛋白氨基酸顺序高度保守,这使其在 HIV-1 感染的检测中显示良好的规律性。 2 P24 抗原的检测方法 ELISA 检测 P24 抗原目前,商品化的 P24 抗原检测试剂盒都是依据夹心 Elis a。首先以 P24 单克隆抗体包被微孔板,加人待检标本孵育,待检标本中若存在 P24 抗原,则被“捕捉”结合于包被抗体, 多克隆抗体、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色,最后用酶联免疫检测仪测定 OD值判断结果。标准 P24 抗原检测方法的阳性检出率相对较低,在无症状携带者中通常仅为 8%一 10%,在艾滋病相关综合征(AIDS-plex ,ARC) 患者中为 12%,在 AIDS 患者中为 37%一