肝素钠效价检测方法.doc

文档介绍：肝素钠效价检测方法
试剂:羊血浆(冰冻保存)、%生理盐水、%CaCl2(用生理盐水配置)、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
待检样品溶液的配置:精确称取肝素钠固体待检样品M mg,%生理盐水定容至100ml,再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液,冷藏保存。
估计M及V的计算公式为:样品估计效价×MV∕100=25×8
估算时V只尽量小于10且取整数,从而计算出M值。
检测方法:将恒温水域调制37℃恒温,取出冰冻羊血浆,融化,并过滤,待用。取2组10只试管,分别加入标样110ul、120ul……200ul,然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、%CaCl2 及过滤后的羊血浆1ml,另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul,同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、%CaCl2 。并将每只试管盖好管盖,倒转3—4次混匀,使内壁湿润,垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管,检查各管的凝固程度,并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准:
①完全凝固:溶液完全凝固,倒转试管并猛敲一下时,凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固:溶液完全凝固,但当猛敲一下时,凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固:大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固:少量溶液凝固。
⑤0凝固:溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为
V=V2-(V2-V1)×(-S1)∕(S2-S1)
(S1:小凝固度;S2:大凝固度;V1:相邻两管大凝固度加入的微升数;V2:相邻两管小凝固度加入的微升数。)
待检样品效价计算公式:
F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数
注意事项:
实验室操作环境必须控制在30℃以下。
,需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只, %CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ,盖好管盖,倒转3—4次混匀,使内壁湿润,垂直放入37℃水域5min,5min后检查血浆是否凝固,如血浆凝固则可使用,未凝固则不能使用。
如在检测过程中,标样的1∕2凝固点高于200ul,则需重新调整羊血浆的1∕2凝固点。方法如下:取3组各10只试管
组一: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul
8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul
%CaCl2 ml
羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
组二: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul
8%柠檬酸钠 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul
%CaCl2 0