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文档介绍：免疫胶体金技术 Immunogold Technique 一. 概述(一) 发展历史 u1971 年 Faulk 和 Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合, 制备成金标抗体, 检测细菌表面抗原的分布 u 1975 年 Horisberger 等把胶体金技术推广应用于扫描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究 u 1978 年 Geoghegan 发表了胶体金标记物在光镜水平的应用 u1981 年 Danscher 建立了银显影液增强,光镜下金颗粒可见性的方法 u1983 年 Moeremans 等在蛋白质转移电泳中应用了免疫金银染色法 u 1986 年 Fritz 等在免疫金银法基础上成功进行了彩色免疫金银染色免疫胶体金技术以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研究中,对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大分子进行定位研究(二)胶体金的基本概念胶体金,一般指金的水溶液,又称金溶胶。--- 金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶胶。其中分散的金颗粒直径在 1~100 nm 之间。二. 胶体金的制备(一) 可用多种方法制备胶体金 :包括机械分散法、超声波法、电分散法和胶溶法等 :包括物理凝聚法、化学凝聚法(氧化法、水解法和还原法) 其中应用最多的是化学还原法化学还原法【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂,使金离子还原为金原子。在适当条件下,还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒, 形成金溶胶。【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大, 15~150 nm 白磷还原制备的金颗粒直径较小, 3~12 nm 【具体制备方法】(二)影响溶胶稳定性的因素 u电解质 u胶体金浓度 u温度 u大分子物质(三)胶体金的鉴定【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小及金颗粒的均匀程度【鉴定方法】将胶体金滴在覆有 Formvar 膜或碳- Formvar 膜的镍网上,空气干燥,透射电镜下观察,拍照,测量金颗粒的直径,并计算 100 个以上胶体金颗粒直径的平均值及标准差(四)制备胶体金的注意事项 1. 玻璃器皿的清洁 2. 试剂配制 3. 影响胶体金颗粒大小的因素玻璃器皿清洗→清洁液浸泡 24 h →流水冲→蒸馏水反复洗涤→晾干应尽量使用分析纯试剂各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制加入还原剂的速度搅拌是否均匀制备胶体金所用的烧瓶大小