文档介绍：色谱柱的选择博纳艾杰尔科技
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影响C18色谱柱性能的主要因素
色谱柱与色谱填料的特性
1、 柱填料
硅胶纯度
粒径
比表面积
孔径
2、 色谱柱的构型
色谱柱直径
色谱柱长度
3、 固定相
键合类型
残余硅羟基的影响
反相键合相的保留行为
键合硅胶的稳定性
物理因素
化学因素
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柱填料对色谱柱性能的影响
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度I
-二羟基萘
-二羟基萘
TF=
Brand W, AQ Column 5μm, ×150mm
Brand Z,C18 Column 5μm, ×150mm
Venusil MP C18 5μm, ×150mm
Brand H, C18 Column 5μm, ×150mm
Brand U,C18 Column 5μm, ×150mm
！
TF=
TF=
TF=
TF=？
流动相： 甲醇：水=65：35
流速： 1 mL/min
温度： 35℃
检测波长： 230 nm
进样量： 20 μL
硅胶纯度－金属含量
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度II
硅胶纯度－金属含量
d
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径
硅胶粒径和类型对柱效的影响
d
硅胶粒径和类型对压力的影响
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径II
目前市场主要可供选择的填料粒径
，， － 快速液相色谱柱：匹配快速色谱仪
－ 多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo)
， － 普通快速分析
－ 常规分析
颗粒越小，柱效越高,
但是耐污染性能下降，柱压升高.
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：比表面积
每克填料的表面积，与粒度，孔径有关
比表面积大，保留增加，载样量增加，平衡时间增加(梯度洗脱尤为注意)
根据需要选择合适的比表面积
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径I
多孔材料的95%以上表面在孔内部
样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部
孔径至少是样品流体学直径的4倍
300Ǻ孔径用于：超过50个氨基酸的肽或25个残基的低聚寡核苷酸
样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部
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柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径II
小生物分子的保留值在小孔径填料通常更大
条件： C8色谱柱，×150mm， ，
A溶剂，%TFA水溶液；
B溶剂，%TFA于80%乙***－ 水中；
20min梯度，10 30%B；60°C，
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