文档介绍：实验一急性毒性实验?一、目的与要求?1、学****急性毒性试验的方法,掌握 LD50 的测定方法。?2、观察马钱子的毒性反应。?二、实验原理?急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。药物毒性的大小,常用动物的致死量来表示,因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的测定也较准确。在测定致死量的同时,还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。?致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起试验动物一半死亡的剂量,妈药物致死量对数值, 用符号 LD50 表示。由于 LD50 的测定较简便、可靠,而且稳定,现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。 LD50 测定的方法有多种,如 Bliss 法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。以上方法虽各有特点,但都有共同的要求: ?(1)动物:均选用体重 17 ~ 22 克健康小鼠(同次试验体重相差不得超过 4克),或选用体重 120 ~ 150 克(同次试验体重相差不得超过 10 克)健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半。(2)给药途径:要求采用两种给药途径,其中必须有一种与临床所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的 LD50 。值得提出的是,临床上虽然不用腹腔注射,但动物实验因腹腔注射给药方便,吸收迅速,颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化(如纤维性病变等),那么啮齿类动物腹腔注射的 LD50 ,参数很接近于静脉给药的 LD50 。口服制剂无法通过注射给药途径时,可只用胃肠给药。(3)试验周期和观察指标:给药后至少观察 7天。观察期间应逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。?(4)正式试验前,均须先用少量动物进行预试试验,大致测出受试药物引起 0% 和 100% 死亡率的致死量范围,然后安排正式试验。正式试验组数不得少于三个剂量组,一般选用 4~5个剂量组,每组动物数为 10 ~ 20 只。?(5)报告 LD50 时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范围、给药途径及每个剂量组动物数等,还需注明受试药物的配制方法、给药剂量、各组剂量间的比值(一般以 ~ 为宜)、给药容积、观察时间及计算方法。还须标出 LD50 的 95% 可信限。三、实验材料和试剂?动物:小鼠?药品:马钱子水煎液?器材:注射器、灌胃针头、鼠笼四、操作方法?1、预试实验:预试实验目的是为了找出引起动物 0% ( Dn )和 100% ( Dm )死亡的剂量,以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动物( 6~9只小鼠)进行,将动物随机分为 3组,组间剂量比值一般以 1: 或1: 为宜。灌服或腹腔注射量以体重为度。预试实验应进行到找出 Dn 和 Dm 后方可安排正式实验。?2、正式实验:在预试实验测得 Dn 和 Dm 的剂量范围内设 4~6个剂量组,最多 10 组。最理想的结果是使 LD50 的上下各有 2~3组。组数愈少,准确性愈差。各剂量组的动物要求相等,至少 10 只动物(分组时应注意分层随机均匀化的原则)。本实验要求最大反应率为 100% , 最小反应率为 0% ,或至少反应率接近 100%