文档介绍：免疫系实验免疫比浊法检测免疫球蛋白 1 12材料和方法 3实验结果实验原理 2 实验原理免疫球蛋白( Ig)是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白,能与诱导其产生的抗原发生特异性结合,是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染,如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、肝脏疾病患者中可有 IgG 、 IgA 、 IgM 升高:在系统性红斑狼疮患者中以 IgG 、 IgA 或 IgG 、 IgM 升高较多见;在类风湿关节炎中则以 IgM 升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况。 3 实验原理血浆蛋白分析技术经历了: 试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术,其中很重要得一类就是免疫比浊法。 4 实验原理抗体( Ab )与可溶性抗原( Ag )反应,形成一定结构的免疫复合物, 在 PEG 作用下, 成为悬浮于反应溶液中的微粒,使样品浊度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质, 当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时,由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱,故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定时,样品的浊度与其中所含抗原量成正比。 5 实验原理聚乙二醇即 PEG 是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物,聚乙二醇具有高度的亲水性,在水溶液中有较大的水动力学体积,并且没有免疫原性。在免疫反应中,为增强抗原抗体反应常使用增聚剂,如 3- 4%的聚乙二醇等,利用其破坏抗原抗体的水化层,促进其靠近反应,但如浓度不适合,高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 6 优点稳定性好,敏感性高(达 ng/L) 、精确度高,干扰因素少,结果判断更加客观、准确。快速、简便,结果回报时间短,便于及时将各种信息向临床反馈,又可节约大量人力物力,利于大批量样品的处理。能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。可利用多道计数器、测光仪,同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目,血清用量少,具有明显的应用优势。免疫比浊法的特点: 实验原理 7 缺点当抗体或抗原大量过剩时,出现可溶性的复合物,造成误差。应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩,此值要预先测定。受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度,造成假性升高。少量小抗原抗体复合物极难形成浊度,除非放置较长时间。如要形成较大的的复合物,抗原抗体量应较大。实验原理免疫比浊法的特点: 8 实验材料 A,M,G ( IgA, IgM, IgG )测定试剂 A,M,G ( IgA, IgM, IgG )校准品,蒸馏水, 血清样本、试管、水浴箱 9实验方法空白管校准管样本管+蒸馏水( 10 ?L) +校准品( 10 ?L) +样品血清( 10 ?L) OD 340 +Ig X试剂( 1mL ) 37 ℃ 5min 37 ℃,10min 混匀 10