文档介绍：氨基酸分析
1958 Spackman, Stein and Moore
第一次实现氨基酸自动分离和定量
NH2
R C COOH
H
UV-210nm
1
最新课件
氨基酸衍生化方法
柱后衍生
柱前衍生
氨基酸
衍生化后的氨基酸
试剂
色谱柱
检测器
色谱柱
检测器
2
最新课件
氨基酸
试剂
色谱柱
检测器
柱后衍生
色谱柱 : 阳离子交换柱
试剂 : 茚三酮方法 --- UV/VIS 检测器
OPA方法 --- 荧光检测器
3
最新课件
柱后衍生化分离柱
阳离子交换柱
使用阳离子交换柱，峰分离度较差。
分析所有的氨基酸所需时间较长。
蛋白质水解氨基酸 (45 min)
生物体氨基酸 (120 min)
4
最新课件
茚三酮方法
伯氨基酸和仲氨基酸（亚氨基酸）
检 测 : 440nm ( 脯 氨 酸) or 570nm (primary)
反应温度 : 130 ℃
反应速度 : 快 速
试剂稳定性 : 不稳定（ 必须冷藏）
衍生化产物稳定性 : 稳定
5
最新课件
茚三酮方法
阳离子交换柱
UV/VIS
检 测 器
茚三酮试剂
130 ℃
氨基酸
柱温箱
反应器加热器
6
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OPA 方 法 ( 邻 苯 二 甲 醛)
伯氨基酸
检 测：荧光检测器 (Ex=350nm, Em=460nm)
反应温度： 室 温
反应速度： 快 速
试剂稳定性 : 较 差
衍生化产物稳定性： 较 差
7
最新课件
脯氨酸和羟基脯氨酸分析
脯氨酸和羟基脯氨酸不与OPA试剂 发生反应
在与OPA反应前两种氨基酸应先使 用下列试剂进行氧化
次氯酸盐
氯胺－T
8
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OPA 衍生反应辅助试剂
有硫醇存在时，OPA才会与伯氨基酸发生反应
乙硫醇
2- 硫基乙醇
3- 硫基丙酸
( 非挥发性)
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OPA 方 法
阳离子交换柱
荧光检测器
氨基酸
柱温箱
OPA 试剂
次氯酸盐
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