第三讲高效液相色谱的原理与构造.pptx

文档介绍：第三讲高效液相色谱的原理与构造
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内容概要
一、高效液相色谱简介
二、高效液相色谱的固定相和流动相
三、高效液相色谱分离公式与术语
四、液相色谱仪的基本配置
五、检测器的种类和用途
六、色谱柱简介
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一、 什么是HPLC？
高效液相色谱：
— HPLC (High Performance Liquid Chromatography )
—是一种区别于经典液相色谱，基于仪器方法的高效
能分离手段：高性能色谱柱，高精度输液泵，高灵
敏度检测器…
—广泛应用于各个领域:
医药，环保，石化，生命科学，食品，农业…
—无论在技术上，理论上，还是在应用上仍有较大的
发展空间: 超高压液相色谱(UPLC)的创立
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高效液相色谱的流程
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二、高效液相色谱固定相和流动相
：1. 液-液分配及离子对分离固定相
（1）全多孔型担体
由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；
现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体
（薄壳型微珠担体）
30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
表面积小，柱容量底；
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（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相；
a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C
b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；
c. 硅碳键型： ≡Si—C
d. 硅氮键型： ≡Si—N
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化学键合固定相的特点：
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；
（2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；
耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；
（4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性；
（5）有利于梯度洗脱；
存在着双重分离机制：
(键合基团的覆盖率决定分离机理)
高覆盖率：分配为主；
低覆盖率：吸附为主；
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-固吸附分离固定相
种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰***等；
结构类型：全多孔型和薄壳型；
粒度：5～10 μm；
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结构类别：
（1）薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂；
（2）离子交换键合固定相
薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团）
树脂类别：
（1） 阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性）
（2） 阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性）
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4. 空间排阻分离固定相
（1）软质凝胶
葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构；
水为流动相。适用于常压排阻分离。
（2）半硬质凝胶
苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶；
非极性有机溶剂为流动相，不能用***、乙醇等极性溶剂
（3）硬质凝胶
多孔硅胶、多孔玻珠等；
化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。
可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
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