文档介绍：. 取经验及原理总结主办单位:螺旋网主讲人: wsuquan 时间: 主要内容?一、核酸的发现、核酸的分类和功能、核酸的理化性质?二、细胞裂解?三、核酸提取?四、核酸纯化?五、核酸检测?六、核酸除杂质核酸的发现核酸是 1869 年米歇尔() 在脓液的白细胞中发现的,他当时称之为核素。阿尔特曼() 于1889 年认识其酸性后,定名为核酸。核酸分为核糖核酸 (RNA) 和脱氧核糖核酸 (DNA) 两大类。脱氧核糖核酸( DNA ) ?DNA 分子含有生物物种的所有遗传信息, 分子量一般都很大(除 RNA 病毒外)。?DNA 为双链分子,其中大多数是链状结构大分子,也有少部分呈环状结构。核糖核酸( RNA ) ? RNA 主要是负责 DNA 遗传信息的翻译和表达,分子量要比 DNA 小得多。 RNA 为单链分子, 根据 RNA 的功能,可以分为三种: 信使核糖核酸( mRNA ); 转运核糖核酸( tRNA ); 核蛋白体核糖核酸( rRNA )。核酸的理化性质? RNA 的纯品都呈白色粉末或结晶, DNA 则为白色类似石棉样的纤维状物。 DNA 、 RNA 和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂, 它们的钠盐比游离核酸易溶于水, RNA 钠盐在水中溶解度可达 40g/L , DNA 钠盐在水中为 10g/L ,呈黏性胶体溶液。细胞裂解?裂解原理?细胞的裂解方法?裂解方法的评价?样品与裂解液的比例细胞裂解-裂解原理?经典的裂解液几乎都含有去污剂和盐。盐的作用,除了提供一个合适的裂解环境,还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏、维持核酸结构的稳定等。去污剂则是通过使蛋白质变性,破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质,从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶,利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段,促进核酸与蛋白质的分开,同时,也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。细胞裂解-细胞的裂解方法?机械方法?化学试剂法?反复冻融法?酶解法细胞裂解-裂解方法的评价?含蛋白酶的裂解方法,可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。?高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT 、 GuHCl 等) 的裂解方法,是抽提 RNA 的首选。?含 CTAB 的裂解液,几乎成为富含多糖的样品, 如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。? SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法,具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。