细胞的原代与传代培养.ppt

文档介绍：细胞的原代与传代培养
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一、原代培养
概念：取自体内新鲜组织并置于体外条
件下生长的细胞在传代之前称为
原代培养。
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原代培养技术的重要意义:
原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性，而且大多数细胞表现出原来组织的特性。
利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。
原代培养也是建立各种细胞系（株）必须经过的阶段。
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原代培养
消化法：这种培养过程主要是采用无菌操作的方法，把组织（或器官）从动物体内取出，经酶消化处理，使分散成单个细胞，然后在人工条件下培养，使其不断地生长和繁殖。
消化法
贴块法
冷消化
温消化
一次性消化
分次消化
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贴块法
消化法
原代培养方法分类
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分次消化
消化法的分类
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解离释放细胞的方法
最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。
用酶学解离细胞法解离细胞是体外培养动物细胞时分散组织的基本方法，最常用的消化酶是胰蛋白酶和胶原酶两种。
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动物细胞原代培养流程的示意图
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器材和液体的准备
细胞培养用的玻璃器材
培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒中，干热或湿热灭菌后备用
手术器材、瓶塞等
15磅，121℃，20分钟蒸气灭菌
DMEM培养液、消化液、PBS液等
用滤器过滤后备用
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方法与步骤（举例:心肌细胞消化培养法）
（1）动物处死：将出生2～3d乳鼠，用拉颈椎方法处死。腹部向上钉在蜡盘中，用碘酒和酒精棉球擦拭腹部消毒。
（2）剪取心脏：在无菌条件下将心脏（心尖）取出，置于无菌培养皿中，用Hanks液洗涤1-2次去除血污；放入另一培养皿中，纵向剪开心脏，仔细去除心腔内血污后剪成1mm3大小的组织块，再并用Hanks液洗涤2～3次，直到液体澄清。
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