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实验四肝脏dna提取概论.ppt

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文档介绍

文档介绍:实验四肝脏DNA提取概论
核酸是具有重要生物化学功能的生物大子,最初从细胞核分离出来,又具有酸性,故称为核酸。
脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)
细胞核
遗传信息的携带者
核糖核酸
(ribonucleic acid, RNA)
细胞质
蛋白质的生物合成,表达调控
DNA的一般提取步骤:
生物材料的选择
从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。由于DNA 分子量较小,提取时易保持其结构完整性。 细菌及高等动植物中,DNA 分子量较大,易被机械张力剪断。
细胞的破碎
机械法
物理法
化学破碎方法
酶学破碎方法
细胞器的分离
在提取细胞线粒体和叶绿体DNA时,必须首先把线粒体和叶绿体与其它细胞器分离出来,一般采取在适当介质中的差速离心法分离。
DNA的提取
去除蛋白质:酚、氯仿
去除多糖、脂类:高盐
抑制DNase活性:去污剂,如SDS、CTAB
DNA的沉淀:乙醇或异丙醇
DNA的纯化
有机溶剂抽提
柱层析法
梯度离心法
酶温和消化杂质等
DNA提取的几种方法:
浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离。
阴离子去污剂法
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键相结合,SDS或二甲苯酸钠等阴离子去污剂能使蛋白质发生变性,从而破坏这种价键,因此可以采用阴离子去污剂提取DNA。此法可以直接从生物材料中提取DNA 。
苯酚抽提法
 苯酚作为蛋白变性剂,,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。

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