文档介绍：实验三环境和人体微生物的检验及无菌操作技术
目的要求
掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检测环境和人体中微生物的存在，体会微生物分布的广泛性。
学****无菌操作的技术，掌握平板划线分离微生物的方法。
实验原理
自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的微生物集体群落。

每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同环境下微生物的数量、种类和特点。
实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基(PCA)、马铃薯葡萄糖培养基（PDA ）、改良高氏1号培养基；
土样：地面以下5-10cm的土壤；
其他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器；
实验程序 Ⅰ（无菌操作技术）
在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3或者覆盖皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。
倒平板
稀释涂布平板法（移液枪稀释）
实验程序 Ⅱ （土样的稀释分离）
制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。
稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液1mL，放入9mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-6的稀释液。
(注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。)
土样的稀释方法示意图
图1 从土壤中分离微生物操作过程
实验程序 Ⅱ （环境及人体各部位取菌样）
共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、头发、空气和土壤稀释液中的10-5、10-6两个稀释浓（，无菌操作加到平板上）