文档介绍：兰州百合的组织培养技术一、实验目的 1、学****并掌握植物组织培养技术 2、应用植物组织培养技术快速繁殖兰州百合 3、通过以百合鳞片为外植体进行组培,掌握对试验材料的消毒、接种方法,初步掌握外植体愈伤组织诱导的方法。二、实验原理植物组织培养再生植物的理论基础是细胞全能性,是指在多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育的全部基因,具有发育成完整个体的潜力。离体的植物组织在一定条件下,可发生“脱分化”,即已经分化了的植物细胞重新分裂生长,形成均一的无组织结构的细胞团,即愈伤组织。这种愈伤组织在一定条件下,又能“再分化”出根和芽等器官。在该过程中,植物生长调节物质起着决定作用,调控愈伤组织的芽或根的分化。三、材料 1、试剂: NH 4 NO 3, KNO 3, CaCl 2·2H 2 O, MgSO 4·7H 2 O, KH 2 PO 4, KI, H 2 BO 3, MnSO 4·4H 2 O, ZnSO 4·7H 2 O, Na 2· MoO 4·2H 2 O, CuSO 4·5H 2 O, CoCl 2·6H 2 O, Na 2? EDTA ? 2H 2O, FeSO 4· 7H 2O ,烟酸,甘氨酸, 盐酸硫***素,肌醇, 盐酸吡哆醇; 琼脂,蔗糖,蒸馏水, NAA , 6-BA , 1mol/LHCl , 1mol/LNaOH ;升***。 2 、仪器: 冰箱,天平,酸度计或 pH 试纸, 电炉,微波炉,高压灭菌锅, 烘箱,超净工作台,光照培养箱等 3 、基本工具: 三角锥瓶、容量瓶、吸量管、量筒、移液器、烧杯、培养皿、滤纸、牛皮纸、封瓶膜、玻璃棒、镊子、剪刀等。 4 、生物材料:市售兰州百合。四、方法(一) MS 培养基的配制 MS 培养基母液的配制方法如下: (1) 大量元素的配制(10×): 按母液配制表 1 上的量依次称取 KNO 319g 、 NH 4 NO 3 、 MgSO 4·7H 、 KH 2 PO , 分别用少量的蒸馏水彻底溶解, 然后再将它们混溶,以防互相发生反应,最后用容量瓶定容至 1L (如需求量不大可按比例减少) , 转入棕色试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。(2) 钙盐的配制:称取 CaCl 2·2H , 用少量的蒸馏水充分溶解,最后用容量瓶定容至 1L (如需求量不大可按比例减少) , 转入棕色试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。(3) 微量元素的配制: 依次称取 MnSO 4·4H 2 、 ZnSO 4·7H 、H 3 BO 、、 Na 2 MoO 4·2H 、 CuSO 4·5H 、 CoCl 2·6H , 分别用少量的蒸馏水彻底溶解,再将它们混溶,最后用容量瓶定容至 1L (如需求量不大可按比例减少) ,转入棕色试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。(4) 铁盐的配制:将称好的 FeSO 4·4H 20和 Na 2 EDTA 分别放到 450ml 蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将 pH 调至 ,最后用容量瓶定容至 1L(如需求量不大可按比例减少),保存在棕色玻璃瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。表培养基母液的配制母