文档介绍：Solarbio*
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琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase, SDH试剂盒使用说明
微量法
货号：BC0955
规格:100管/96样
产品内容：
试剂一：100mL<1 瓶，-20 C保存；
试剂二：20m<l 瓶，-20 C保存；
试剂三： 支，-20 C保存；
试剂四：粉剂<1 瓶，4C保存；
试剂五：粉剂<1 支，-20 C保存；
产品说明：
SDH（EC ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。 SDH 是线粒体的一种标
志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。
此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（ PMS传递还原2,6-二
***酚靛酚（DCPIP，并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2. 6-DPIP 的还原速度，代表SDH酶活性。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿 /96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
样本的前处理:
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组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1、，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰 浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g, 4C离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g, 4C离心10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 SDH(此步可选做)。
5、 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎(冰浴，功率20%
或200W超声3秒，间隔10秒，重复30次)，用于线粒体SDH 活性测定。
二、 测定步骤和加样表
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至600nm蒸馏水调零。
2、 样本测定
在试剂四中加入18mL蒸馏水充分溶解，置于37C(哺乳动物)或25C(其它物种)水
浴10min；用不完的试剂4C保存一周；
在试剂五中加入1mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂 4C保存一周；
在微量石英比色皿或96 孔板中加入10^L样本、10讥 试剂五和180讥 试剂四，混
匀，立即记录600nm处20s时的吸光值A1和1min20s后的吸光值A2,计算△ A=A1-A2
三、 SDH^性的计算
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二***酚靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH 活性(n mol/mi n /mg prot ) = [ △ AXV 反总 d)x 10 9]十(Cpr XV 样)十 T=952
XA A- Cpr
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按样本鲜重计算
单